Der Hauptunterschied zwischen RP-HPLC und HIC besteht darin, dass RP-HPLC eine polarere mobile Phase und eine weniger polare stationäre Phase verwendet. Während HIC eine hydrophobe stationäre Phase verwendet, die es den hydrophoben Molekülen ermöglicht, sich daran anzulagern.
Chromatographie ist eine Analysetechnik, die hilft, ein Gemisch in seine Bestandteile zu trennen. Zuerst müssen wir die zu trennende Probe in einer Lösung auflösen. Dieses Lösungs-Stoff-Gemisch wird als mobile Phase bezeichnet. Dann wird die mobile Phase durch ein anderes Material geleitet, das als stationäre Phase bezeichnet wird. Die stationäre Phase bestimmt die Trennung der Komponenten. Die Trennung erfolgt aufgrund der Materialverteilung zwischen der mobilen Phase und der stationären Phase.
Was ist RP-HPLC?
Der Begriff RP HPLC steht für Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Es beinh altet die Trennung von Komponenten in einem Gemisch nach Hydrophobizität. Die hydrophoben Komponenten in der mobilen Phase verbinden sich mit den immobilisierten hydrophoben Liganden auf der stationären Phase, während hydrophile Komponenten durch die stationäre Phase eluieren, ohne sich an die Oberfläche der stationären Phase anzuheften.
Abbildung 01: HPLC-Apparatur
Darüber hinaus ist diese Methode im Vergleich zu anderen chromatographischen Techniken besser reproduzierbar und auch breit anwendbar. Daher verwenden wir diese Methode im Labor für über 75 % aller HPLC-Methoden. Meistens verwenden wir eine wässrige Mischung aus Wasser mit einem mischbaren polaren organischen Lösungsmittel als mobile Phase. Dadurch wird die Anlagerung der hydrophoben Komponenten in der Lösung an die Oberfläche der stationären Phase gewährleistet.
Was ist HIC?
Der Begriff HIC steht für Hydrophobic Interaction Chromatography. Es ist eine Art Umkehrphasen-HPLC, und diese Methode wird hauptsächlich zur Trennung von großen Biomolekülen wie Proteinen verwendet. Bei dieser Methode müssen wir ein wässriges Medium verwenden, um die Probe des Biomoleküls herzustellen. Dies liegt daran, dass organische Lösungsmittel eine Denaturierung der Proteine verursachen können. Darüber hinaus nutzt diese Technik die Wechselwirkung zwischen großen Molekülen mit einer leicht hydrophoben Oberfläche der stationären Phase. Darüber hinaus müssen wir eine hohe Salzkonzentration in der Probe verwenden, da dies dazu führt, dass das Protein auf der Verpackung zurückgeh alten wird; Dieser Vorgang wird als Aussalzen bezeichnet. Indem wir die Salzkonzentration schrittweise verringern, können wir die Biomoleküle getrennt nach ihrer Hydrophobizität eluieren lassen.
Normalerweise verwendet diese Methode die Bedingungen, die denen der Ionenaustausch-Chromatographie entgegengesetzt sind. Bei dieser Technik müssen wir zuerst eine Pufferlösung durch die Säule leiten, um die Solvatation von gelösten Stoffen in der Probe zu reduzieren. Es macht die hydrophoben Regionen des Proteins freigelegt. Wenn das Molekül jedoch hydrophober ist, wird weniger Salz benötigt, um die Bindung zu fördern. Dabei werden die weniger hydrophoben gelösten Stoffe zuerst eluiert und entsprechend der Änderung der Salzkonzentration die hydrophoberen gelösten Stoffe zuletzt eluiert.
Was ist der Unterschied zwischen RP-HPLC und HIC?
Chromatographie ist ein analytisches Verfahren zur Trennung von Komponenten in einem Gemisch. RP HPLC und HIC sind zwei spezialisierte chromatographische Techniken. Der Hauptunterschied zwischen RP-HPLC und HIC besteht darin, dass RP-HPLC eine polarere mobile Phase und eine weniger polare stationäre Phase verwendet, während HIC eine hydrophobe stationäre Phase verwendet, an der sich die hydrophoben Moleküle anlagern können.
Die folgende Infografik fasst den Unterschied zwischen RP-HPLC und HIC zusammen.
Zusammenfassung – RP-HPLC vs. HIC
Chromatographie ist ein analytisches Verfahren zur Trennung von Komponenten in einem Gemisch. RP HPLC und HIC sind zwei spezialisierte chromatographische Techniken. Der Hauptunterschied zwischen RP-HPLC und HIC besteht darin, dass RP-HPLC eine polarere mobile Phase und eine weniger polare stationäre Phase verwendet, während HIC eine hydrophobe stationäre Phase verwendet, an der sich hydrophobe Moleküle anlagern können.
