Der Hauptunterschied zwischen GFP und EGFP besteht darin, dass das GFP ein Wildtyp-Protein ist, das in das molekulare Klonen von Nicht-Säugetierzellen eingebaut wird, während das EGFP ein verbesserter oder veränderter GFP-Typ ist, der auf Säugetierzellen verwendet werden kann.
Molekulares Klonen ist eine fortschrittliche Technik, die Wissenschaftler immens nutzen, um Proteine mittels rekombinanter Technologie zu exprimieren. In der rekombinanten DNA-Technologie ist es notwendig, den rekombinanten Vektor erfolgreich in einen Wirtsorganismus zu transformieren. Daher sollte während des Transformationsprozesses identifiziert und bestätigt werden, ob das interessierende Gen in den Wirt transformiert wurde oder nicht. Um dies zu beurteilen, wenden Molekularbiologen mehrere Techniken an. Eine dieser Techniken ist das Reportergen. Diese Reportergene wirken als selektierbare Marker, um die richtigen Transformanten auszuwählen. Somit sind das Green Fluorescent Protein (GFP) und das Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) zwei Reporterproteine, die beim molekularen Klonen verwendet werden.
Was ist GFP?
GFP ist ein Wildtyp-Protein, das 238 Aminosäurereste und mehrere selektierbare Regionen von Aminosäuresequenzen enthält, die es von den anderen fluoreszierenden Proteinen unterscheiden. Außerdem war dieses Wildtyp-Protein ursprünglich aus Aequorea Victoria isoliert; eine Quallenart. Bei natürlichen Phänomenen war die Qualle jedoch in der Lage, als Reaktion auf bestimmte Reize eine grüne Fluoreszenz zu erzeugen.
Früher überraschte dieses Konzept die Wissenschaftler, und sie beschlossen, es für ihre rekombinanten DNA-Technologien zu verwenden. Folglich verwendeten Wissenschaftler diese mutierte Form des Wildtyp-Gens als Reportergen in ihren Genexpressionsstudien. Das Wildtyp-Gen von GFP ist in der Lage, ein Protein zu produzieren, das bei Raumtemperatur oder unter UV-Licht fluoresziert. Daher exprimiert und erzeugt es Fluoreszenz, wenn es in die Transformanten eingeführt wird. Erfolgt die Fluoreszenz nach dem Transformationsprozess, bestätigt sie den Erfolg des Transformationsprozesses. In einfachen Worten signalisiert die Fluoreszenzemission die erfolgreiche Transformation des Vektors, der das interessierende Gen in den Wirt trägt.
Abbildung 01: GFP
Aus diesem Grund fungiert das GFP als In-vivo-Marker der Genexpression. Gegenwärtig werden gentechnische Verfahren zur Herstellung von GFP verwendet. Außerdem sind viele verbesserte Versionen von GFP wie EGFP verfügbar. Daher ermöglicht dies eine effiziente Verwendung des GFP in molekularen Klonierungs- und Genexpressionsstudien.
Was ist EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein oder EGFP ist eine verbesserte Version von GFP. In einfachen Worten können wir EGFP als eine manipulierte Version von Wildtyp-GFP definieren. Wenn das Wildtyp-Gen von GFP mutiert, erzeugt es vorteilhafte Wirkungen. Daher ermöglicht das mutierte GFP-Gen die Expression neuer Merkmale, und als Ergebnis davon können wir Enhanced GFP mit verbesserten Eigenschaften produzieren. Darüber hinaus können wir durch Bestrahlung oder chemische Methoden erfolgreich Mutationen in das Wildtyp-GFP-Gen einführen. Diese mutierten Gene produzieren dann das EGFP, das vorteilhaftere Eigenschaften hat.
Abbildung 02: EGFP
Die verbesserten Eigenschaften von EGFP sind wie folgt;
- Kann stärkere Fluoreszenzsignale abgeben.
- Hat eine hohe Empfindlichkeit.
- Kann bei Säugerzellen anstelle von Prokaryoten und anderen Eukaryoten niedrigerer Stufe verwendet werden.
- Erhöht auch die Reinheit des Produkts.
Daher ist EGFP im Vergleich zu GFP die bevorzugte Wahl für Genexpressionsstudien. Allerdings ist das Produkt im Vergleich zu GFP teurer.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen GFP und EGFP?
- GFP und EGFP sind zwei Proteine, die grüne Farbe abgeben können
- Daher fungieren beide als Reporterproteine in Genexpressionsstudien.
- Außerdem ist es möglich, beides mit rekombinanter DNA-Technologie zu synthetisieren.
- Außerdem ist es einfach, diese beiden Typen weiter zu mutieren, um verbesserte Formen zu synthetisieren.
Was ist der Unterschied zwischen GFP und EGFP?
Das Reportergen ist ein Gen, das sich mit dem interessierenden Gen in der rekombinanten DNA-Technologie verbindet. Es signalisiert dem Wirt die erfolgreiche Transformation des rekombinanten Vektors. Hier sind GFP und EGFP zwei Arten von grün fluoreszierenden Proteinen, die als Reporterproteine fungieren. Der Hauptunterschied zwischen GFP und EGFP besteht jedoch darin, dass das GFP ein Wildtyp ist, während EGFP eine konstruierte Version von GFP ist. Darüber hinaus hat EGFP vorteilhaftere Eigenschaften als GFP. Beispielsweise erzeugt EGFP stärkeres Fluoreszenzlicht und ist empfindlicher als GFP. Ein weiterer Unterschied zwischen GFP und EGFP sind die Systeme, in denen wir diese verwenden können. Systeme, die keine Säugetiere sind, verwenden GFP, während Säugetiersysteme EGFP verwenden.
Die folgende Infografik zeigt den Unterschied zwischen GFP und EGFP in tabellarischer Form.
Zusammenfassung – GFP vs. EGFP
GFP und EGFP sind Reporterproteine in molekularen Klonierungs- und Genexpressionsstudien. GFP ist das Wildtyp-Protein, das ein grün fluoreszierendes Protein ist. Das Protein wurde ursprünglich aus der Qualle Aequorea victoria isoliert. Im Gegensatz dazu ist EFGP eine verbesserte Form des GFP-Proteins. Es ist eine Mutante des Wildtyps mit verbesserten Eigenschaften. Daher hat EFGP die höhere Signalstärke und höhere Empfindlichkeit. Daher können wir es auf Säugetiervektoren anwenden. Im Gegensatz dazu erfolgt die Verwendung von GFP hauptsächlich nur bei Nicht-Säugetier-Vektoren. Insgesamt ist dies der Unterschied zwischen GFP und EGFP.
