Der Hauptunterschied zwischen kolorimetrischen und fluorometrischen Assays besteht darin, dass der kolorimetrische Assay die Konzentration farbiger Verbindungen in einer Lösung bestimmt, während der fluorometrische Assay den kinetischen Mechanismus einer Lösung bestimmt.
Ein biochemischer Assay ist eine Technik, die die Aktivität eines biologischen Moleküls oder einer biologischen Substanz analytisch nachweist oder quantifiziert. Es ist ein In-vitro-Verfahren. Kolorimetrische Assays und fluorometrische Assays sind zwei Arten üblicher biochemischer Assays, die in Laboratorien durchgeführt werden. Mehrere Techniken wie ELISA und Western Blotting sind ebenfalls komplexe biochemische Assays zur Quantifizierung der Stoffwechselaktivität und Messung des funktionellen Verh altens von Biomolekülen wie Proteinen, Enzymen und anderen kleinen Molekülen. Diese Arten von Assays werden zur Identifizierung von Protein-DNA-, Protein-RNA- und Protein-Protein-Wechselwirkungen verwendet.
Was ist ein kolorimetrischer Assay?
Ein kolorimetrischer Assay ist eine Technik, die die Konzentration farbiger Verbindungen in einer Lösung bestimmt. Mit anderen Worten, ein kolorimetrischer Assay ist eine Reaktion, die aufgrund einer enzymatischen oder chemischen Reaktion zwischen Reagenzien und Analyten zu einer Farbänderung führt. Kolorimetrische Assays werden in der Biochemie praktiziert, um auf Enzyme, spezifische Verbindungen, Hormone, Antikörper und andere Analyten zu testen. Sie verwenden Kolorimeter oder Spektralfotometer. Kolorimeter sind Instrumente, die farbige Proben charakterisieren, um ein objektives Maß für Farbeigenschaften bereitzustellen. Ein Spektralfotometer ist ein Gerät, das die Lichtintensität als Funktion der Farbe oder Wellenlänge des Lichts misst.
Abbildung 01: Kolorimetrischer Assay
Wie funktioniert ein kolorimetrischer Assay?
Bei einem kolorimetrischen Assay wird eine Platte mit einem bestimmten, an Vertiefungen gebundenen Antikörper vorbereitet. Dann wird die Probe hinzugefügt. Dadurch kann die Probe an den Antikörper binden. Dann werden ein Detektionsantikörper und ein Substrat zu den Vertiefungen gegeben, um mit der Detektionssonde zu reagieren. Stopplösung wird am Ende vor der Ablesung zugegeben. Ohne die Probe bleibt eine leere Vertiefung, die Blank genannt wird. Je dunkler die Farbe im kolorimetrischen Assay, desto größer die Analytkonzentration. Normalerweise wird nur eine Wellenlänge benötigt, um die Messung durchzuführen. Aber wenn es eine Referenzmessung gibt, werden zwei oder mehr Wellenlängen verwendet.
Was ist ein fluorometrischer Assay?
Der fluorometrische Assay ist eine Technik, die den kinetischen Mechanismus von Enzymreaktionen bestimmt. Ein fluorometrischer Assay erfolgt mit einer Bildung eines fluoreszierenden Produkts aus einem nicht fluoreszierenden Substrat oder umgekehrt. Dieser Assay nutzt auch den Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer (FRET), bei dem die enzymatische Reaktion die Position von zwei Fluorophoren im Substrat ändert und somit die Fluoreszenzintensität ändert.
Abbildung 02: Fluorometrischer Assay
Fluorometrische Assays sind im Allgemeinen viel empfindlicher als andere Assays. Die diagnostischen Enzymschätzungen in Gewebe-, Zell- oder Flüssigkeitsproben von Patienten verbessern sich aufgrund der höheren Sensitivität.
Wie funktioniert ein fluorometrischer Assay?
Bei einem fluorometrischen Assay wird der Probe in der Platte ein Substrat zugesetzt und die Fluoreszenzreaktion mit dem Plattenlesegerät gemessen. Hier wird jede Zelle separat gemessen. Undurchsichtige Platten werden in fluorometrischen Assays verwendet. Dadurch wird die Lichtstreuung reduziert. Für diese Art von Assay sind zwei Wellenlängen erforderlich. Eine Wellenlänge dient der Detektion der Anregung und die andere Wellenlänge der Emission.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen kolorimetrischen und fluorometrischen Assays?
- Kolorimetrischer Assay und fluorometrischer Assay sind zwei Arten von biochemischen Assays.
- Beide Assays dienen der medizinischen Diagnostik.
- Diese Assays beinh alten eine enzymatische Reaktion.
- Beide Assays beinh alten ein Substrat und Analyten.
Was ist der Unterschied zwischen kolorimetrischen und fluorometrischen Assays?
Ein kolorimetrischer Assay ist eine Technik, die die Konzentration farbiger Verbindungen in einer Lösung bestimmt, während ein fluorometrischer Assay eine Technik ist, die den kinetischen Mechanismus von Enzymreaktionen bestimmt. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen kolorimetrischen und fluorometrischen Assays. Darüber hinaus sind die fluorometrischen Assays empfindlicher als die kolorimetrischen Assays; daher haben fluorometrische Assays die Fähigkeit, mehr Analyten nachzuweisen. Somit ist dies ein weiterer wichtiger Unterschied zwischen kolorimetrischen und fluorometrischen Assays. Darüber hinaus benötigen fluorometrische Assays zwei Wellenlängen, während kolorimetrische Assays mit einer Wellenlänge durchgeführt werden.
Die folgende Infografik listet weitere Unterschiede zwischen kolorimetrischen und fluorometrischen Assays auf.
Zusammenfassung – Kolorimetrischer vs. fluorometrischer Assay
Ein biochemischer Assay ist ein analytisches Verfahren zur Bestimmung und Quantifizierung zellulärer Stoffwechselreaktionen. Kolorimetrischer Assay und fluorometrischer Assay sind zwei Arten von biochemischen Assays. Der kolorimetrische Assay ist eine Reaktion, die aufgrund einer enzymatischen oder chemischen Reaktion zwischen Reagenzien und Analyten zu einer Farbänderung führt, während der fluorometrische Assay eine Technik ist, die zur Bestimmung des kinetischen Mechanismus von Enzymreaktionen verwendet wird. Beide Assays hängen von einer enzymatischen Reaktion ab, an der ein Substrat und ein Analyt beteiligt sind. Fluorometrische Assays sind empfindlicher als kolorimetrische Assays. Am wichtigsten ist, dass fluorometrische Assays zwei Wellenlängen erfordern, während kolorimetrische Assays mit nur einer Wellenlänge durchgeführt werden können. Somit fasst dies den Unterschied zwischen kolorimetrischen und fluorometrischen Assays zusammen.
