Der Hauptunterschied zwischen direkter und indirekter Immunfluoreszenz besteht darin, dass die direkte Immunfluoreszenz einen einzelnen Antikörper verwendet, der gegen das Ziel von Interesse wirkt, während die indirekte Immunfluoreszenz zwei Antikörper verwendet, um das Ziel von Interesse zu markieren.
Immunfluoreszenz oder Zellbildgebung ist eine Technik, die verwendet wird, um ein spezifisches Zielantigen mit einem Fluorophor zu markieren. Hier ist der Fluorophor eine fluoreszierende chemische Verbindung, die bei Lichtanregung Licht wieder emittieren kann. Wenn ein Fluorophor an das Zielantigen bindet, ermöglicht es den Nachweis des Zielmoleküls in der Probe. Um es weiter zu beschreiben: Wenn ein Antigen an einen spezifischen Antikörper bindet, kann es mit Fluorophoren konjugiert werden. Daher ist es einfach, das Vorhandensein des Zielantigens in der Probe unter dem Fluoreszenzmikroskop nachzuweisen.
Außerdem gibt es zwei Arten von Immunfluoreszenz; direkte und indirekte Immunfluoreszenz. Der Unterschied zwischen direkter und indirekter Immunfluoreszenz liegt hauptsächlich in der Anzahl der verwendeten Antikörper und der Fluorophor-Konjugation. Das heißt, bei der direkten Immunfluoreszenz konjugiert das Fluorophor direkt mit dem primären Antikörper, während bei der indirekten Immunfluoreszenz das Fluorophor mit dem sekundären Antikörper konjugiert.
Was ist direkte Immunfluoreszenz?
Immunfluoreszenz verwendet Antikörper, um spezifische Zielantigene nachzuweisen. Die direkte Immunfluoreszenz ist eine der beiden Arten der Immunfluoreszenz. Bei der direkten Immunfluoreszenz ist ein einzelner Antikörper (primärer Antikörper) beteiligt und das Fluorophor konjugiert direkt mit dem primären Antikörper. Beim Binden des Antikörpers an das Zielantigen emittiert der Fluorophor Fluoreszenz, die durch ein Fluoreszenzmikroskop nachgewiesen werden kann.
Abbildung 01: Direkte Immunfluoreszenz
Die direkte Immunfluoreszenz ist jedoch eine teure Methode, da die primären konjugierten Antikörper im Vergleich zu den sekundären Antikörpern kostspielig sind. Nichtsdestotrotz beinh altet es keinen zusätzlichen Schritt, daher eine kürzere Technik. Darüber hinaus werden unspezifische Bindungen in der direkten Immunfluoreszenz reduziert. Daher ist die Spezies-Kreuzreaktivität gering. Aber beim Nachweis ist die Sensitivität der direkten Immunfluoreszenz im Vergleich zur indirekten Immunfluoreszenz schwach.
Was ist indirekte Immunfluoreszenz?
Indirekte Immunfluoreszenz ist die zweite Art der Immunfluoreszenz, bei der zwei Arten von Antikörpern wie primäre und sekundäre Antikörper an der Markierung des Zielantigens beteiligt sind. Bei diesem Verfahren konjugiert der Fluorophor mit dem sekundären Antikörper. Daher beinh altet diese Technik einen zusätzlichen Schritt.
Abbildung 02: Immunfluoreszenz
Allerdings ist die Sensitivität bei dieser Methode hoch, da mehrere Fluorophore an Sekundärantikörper konjugiert werden können und es den Nachweis erleichtert. Darüber hinaus ist die indirekte Immunfluoreszenz kostengünstiger, da die Konjugation von Sekundärantikörpern kostengünstiger und einfacher ist. Im Vergleich zur direkten Immunfluoreszenz ist die Spezies-Kreuzreaktivität bei der indirekten Methode hoch.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen direkter und indirekter Immunfluoreszenz?
- Es gibt zwei Arten von Immunfluoreszenztechniken.
- Primäre Antikörper und Fluorophore sind an beiden Methoden beteiligt.
- Außerdem tritt bei beiden Methoden die Antigen-Antikörper-Reaktion auf.
- Darüber hinaus verwenden sowohl direkte als auch indirekte Immunfluoreszenz ein Fluoreszenzmikroskop zum Nachweis von Antigen.
Was ist der Unterschied zwischen direkter und indirekter Immunfluoreszenz?
Immunfluoreszenz kann direkt oder indirekt sein, basierend auf der Fluorophor-Konjugation mit den verwendeten Antikörpern. Bei der direkten Immunfluoreszenz konjugiert der Fluorophor mit dem primären Antikörper, der der einzige Antikörper ist, der an dieser Technik beteiligt ist. Im Gegensatz dazu konjugiert bei der indirekten Immunfluoreszenz der Fluorophor mit dem sekundären Antikörper, der eine der beiden Arten von Antikörpern ist, die an der Technik beteiligt sind. Daher ist der Hauptunterschied zwischen direkter und indirekter Immunfluoreszenz der Antikörpertyp, der mit dem Fluorophor konjugiert.
Die folgende Infografik bietet einen direkten Vergleich der Unterschiede zwischen direkter und indirekter Immunfluoreszenz.
Zusammenfassung – Direkte vs. indirekte Immunfluoreszenz
Immunfluoreszenz ist eine Technik, die verwendet wird, um das Vorhandensein spezifischer Antigene in einer Probe nachzuweisen. Diese Technik verwendet spezifische Antikörper. Daher konjugieren die Antikörper dabei mit Fluorophoren, um sie unter Verwendung eines Fluoreszenzmikroskops nachzuweisen. Darüber hinaus gibt es zwei Arten von Immunfluoreszenz, nämlich direkte und indirekte Immunfluoreszenz. Direkte Immunfluoreszenz umfasst einen einzelnen Antikörper und ein Fluorophor, das direkt mit diesem Antikörper konjugiert ist. An der indirekten Immunfluoreszenz sind zwei Antikörper beteiligt; primär und sekundär und Fluorophor konjugiert an den sekundären Antikörper. Da mehrere sekundäre Antikörper mit einem primären Antikörper binden können und mehrere Fluorophore mit sekundären Antikörpern konjugieren können, ist die indirekte Immunfluoreszenz eine sensitivere Methode als die direkte Methode. Außerdem ist die indirekte Methode kostengünstiger als die direkte Methode. Dies ist also der Unterschied zwischen direkter und indirekter Immunfluoreszenz.
