Der Hauptunterschied zwischen BL21 und DH5 Alpha besteht darin, dass BL21 eine proteasedefiziente, gentechnisch veränderte, kompetente E. coli-Zelle ist, die hauptsächlich für die Proteinexpression verwendet wird, während DH5 Alpha eine gentechnisch veränderte, kompetente E. coli-Zelle mit recA1-Mutation ist, die hauptsächlich verwendet wird zur Plasmidtransformation.
E. coli ist einer der bekanntesten Organismen der Wahl für die Produktion rekombinanter Proteine. Es hat sich im Laufe der Jahre zur beliebtesten Ausdrucksplattform entwickelt. Es wird auch als Zellfabrik genutzt. BL21 und DH5 Alpha sind zwei gentechnisch veränderte E. coli-Zellen, die derzeit für die Proteinexpression bzw. Plasmidtransformation verwendet werden.
Was ist BL21?
BL21 ist eine proteasedefiziente, gentechnisch veränderte, kompetente E. coli-Zelle, die hauptsächlich zur Proteinexpression verwendet wird. E. coli BL21 ist eine vom B-Stamm abgeleitete Bakterienzelle. Es weist Defekte der Lon-Protease und der ompT-Außenmembran-Protease auf. Es wird häufig für die Expression rekombinanter Proteine verwendet, da es den exprimierten Proteinen normalerweise Stabilität verleiht. BL21 ist nützlich für die Proteinexpression mit pCold I-IV-DNA und pCold TF-DNA. Aber diese kompetente E. coli-Zelle ist nicht für ein Proteinexpressionssystem vorgesehen, das den T7-Promotor verwendet, wie z. B. das pET-System. Der Grund dafür ist, dass BL21 keine T7-RNA-Polymerase exprimiert. Außerdem wird die Verwendung für die Konstruktion oder Präparation eines Plasmids nicht empfohlen, da es keine recA-Mutation aufweist.
Abbildung 01: BL21
BL21 wurde erstmals 1986 von Studier nach verschiedenen Modifikationen der B-Linie beschrieben. BL21-Zellen fehlt die LON-Protease, die viele fremde Proteine abbaut. Außerdem fehlt ihm ein weiteres Gen, das für die äußere Membranprotease (OmpT) kodiert, deren Funktion es ist, extrazelluläre Proteine abzubauen. Ein Mangel an diesen Proteinen löst die erfolgreiche Produktion von Fremdprotein in E. coli BL21-Zellen aus. Darüber hinaus verhindert die hsdSB-Mutation in diesen Zellen die Methylierung und Zerstörung fremder DNA in den BL21-Zellen.
Was ist DH5 Alpha?
DH5 Alpha ist eine gentechnisch veränderte kompetente E. coli-Zelle mit recA1-Mutation, die hauptsächlich für die Plasmidtransformation verwendet wird. DH5 Alpha E. coli-Zellen werden vom amerikanischen Biologen Douglas Hanahan gentechnisch verändert, um die Effizienz der Transformation zu maximieren. Die DH5-Alpha-Zelle hat drei unterschiedliche Mutationen: recA1, endA1 und lacZΔM15. recA1 ist eine einzelne Punktmutation, die Glycin 160 durch einen Asparaginsäurerest im recA-Polypeptid ersetzt. Diese Mutation setzt die Aktivität der Rekombinasen außer Kraft und inaktiviert die homologe Rekombination. Die endA1-Mutation inaktiviert eine intrazelluläre Endonuklease, die sie daran hindert, das eingefügte Plasmid abzubauen.
Abbildung 02: DH5 Alpha
Darüber hinaus ermöglicht die lacZΔM15-Mutation ein Blau-Weiß-Screening von transformierten Zellen. Diese Zellen sind kompetente Zellen. Sie werden häufig bei der Calciumchlorid-Transformation verwendet, um das gewünschte Plasmid einzufügen. Durch neuere Forschungen wurde festgestellt, dass die DH5-Alpha-Zelle mit der Hanahan-Methode die effizienteste kompetente Zelle für die Plasmidtransformation war.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen BL21 und DH5 Alpha?
- BL21 und DH5 Alpha sind zwei gentechnisch veränderte E. coli
- Beide sind kompetente Zellen.
- Sie bestehen aus unterschiedlichen Mutationen.
- Beide haben keinen natürlichen Lebensraum.
- Diese werden für Laborzwecke wie Expressionsstudien und Klonierungsverfahren verwendet.
Was ist der Unterschied zwischen BL21 und DH5 Alpha?
BL21 ist eine proteasedefiziente, gentechnisch veränderte, kompetente E. coli-Zelle, die hauptsächlich zur Proteinexpression verwendet wird. Andererseits ist DH5 Alpha eine gentechnisch veränderte kompetente E. coli-Zelle mit recA1-Mutation, die hauptsächlich für die Plasmidtransformation verwendet wird. Das ist also der Hauptunterschied zwischen BL21 und DH5 Alpha. Darüber hinaus hat die BL21-E.-coli-Zelle keine recA1-Mutation, während die DH5-Alpha-E.-coli-Zelle eine recA1-Mutation hat.
Die folgende Infografik listet die Unterschiede zwischen BL21 und DH5 Alpha tabellarisch auf.
Zusammenfassung – BL21 vs. DH5 Alpha
Die apathogenen E. coli-Stämme werden von Wissenschaftlern genetisch für Laborexpressionsstudien und Klonierungszwecke entwickelt. BL21 und DH5 Alpha sind zwei gentechnisch veränderte E. coli-Zellen. BL21 wird hauptsächlich für Proteinexpressionsstudien verwendet. Andererseits wird DH5 Alpha hauptsächlich für Plasmidtransformationszwecke verwendet. Dies ist also die Zusammenfassung des Unterschieds zwischen BL21 und DH5 Alpha.
