Der Hauptunterschied zwischen Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC besteht darin, dass die Umkehrphasen-HPLC eine unpolare stationäre Phase und eine polare mobile Phase verwendet, während die Normalphasen-HPLC eine polare stationäre Phase und eine weniger polare mobile Phase verwendet.
Die Normalphasen-HPLC ist die älteste HPLC-Technik, die Tswett bei seinen Trennungen von Pflanzenextrakten verwendet hat; er benutzte Kreide in einer Glassäule. Dies war die klassische Methode der Chromatographie, die dazu führte, dass sie als „normale“Technik bezeichnet wurde. Umkehrphasen-HPLC hingegen ist das Gegenteil der normalen Technik, die Wissenschaftler kürzlich entwickelt haben.
Was ist Umkehrphasen-HPLC?
Umkehrphasen-HPLC ist eine chromatographische Technik, bei der wir eine hydrophobe stationäre Phase verwenden. Unter allen HPLC-Methoden verwenden wir diese Methode aufgrund ihrer breiten Anwendbarkeit und Reproduzierbarkeit zu etwa 70%. Die stationäre Phase ist unpolar und die mobile Phase ist polar.
Meistens verwenden Wissenschaftler eine wässrige Mischung aus Wasser und einem mischbaren, polaren organischen Lösungsmittel wie Acetonitril oder Methanol als mobile Phase. Daher interagieren die Analyten mit der unpolaren stationären Phase.
Was ist Normalphasen-HPLC?
Normalphasen-HPLC ist eine chromatographische Technik, bei der wir eine hydrophile stationäre Phase verwenden. Es ist die traditionelle Methode der HPLC, obwohl wir sie nicht so oft verwenden. Die stationäre Phase ist polar, die mobile Phase unpolar. Noch wichtiger ist, dass die mobile Phase dieser Technik zu 100 % organisch ist. Das bedeutet, dass dafür kein Wasser verwendet wird.
Abbildung 01: Ein Probenprofil für Normalphasen- und Umkehrphasen-HPLC-Chromatogramme gemäß der Polarität der Komponenten im Analyten.
In der Regel enthält die stationäre Phase Silica-, Cyano-, Diol-, Amino-gebundene Phasen usw. Mobile Phasen umfassen organische Lösungsmittel wie Hexan, Ethylacetat usw. Diese Technik basiert auf der Retention von Lösungsmittel- oder Analytmolekülen auf der polare stationäre Phase.
Was ist der Unterschied zwischen Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC?
Umkehrphasen-HPLC ist eine chromatographische Technik, bei der wir eine hydrophobe stationäre Phase verwenden. Die stationäre Phase dieser Technik ist unpolar, während die mobile Phase polar ist. Darüber hinaus verwenden Wissenschaftler eine wässrige Mischung aus Wasser mit einem mischbaren, polaren organischen Lösungsmittel wie Acetonitril oder Methanol als mobile Phase in der Umkehrphasen-HPLC. Im Gegensatz dazu ist die Normalphasen-HPLC eine chromatographische Technik, bei der wir eine hydrophile stationäre Phase verwenden. Die stationäre Phase dieser Technik ist polar, während die mobile Phase unpolar ist. Darüber hinaus verwenden Wissenschaftler organische Lösungsmittel wie Hexan, Ethylacetat usw. als mobile Phase der Normalphasen-HPLC. Die folgende Infografik zeigt den Unterschied zwischen Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC in tabellarischer Form.
Zusammenfassung – Umkehrphasen- vs. Normalphasen-HPLC
Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC-Techniken sind zwei flüssigkeitschromatographische Techniken. Der Hauptunterschied zwischen Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC besteht darin, dass die Umkehrphasen-HPLC eine unpolare stationäre Phase und eine polare mobile Phase verwendet, während die Normalphasen-HPLC eine polare stationäre Phase und eine weniger polare mobile Phase verwendet.
