Der Hauptunterschied zwischen Elisa und Elispot besteht darin, dass Elisa ein enzymgebundener Immunadsorptionstest ist, der die Gesamtkonzentration von sekretierten Signalproteinen bestimmt, während Elispot ein enzymgebundener Immunadsorptionstest ist, der einzelne Zytokin-sekretierende Zellen nachweist.
Elisa und Elispot sind zwei enzymgebundene Immunosorbent-Assays, die in der Medizin, Pflanzenpathologie, Biotechnologie und verschiedenen pharmazeutischen Industrien weit verbreitet sind. Bei diesen Techniken wird ein Proteinanalyt durch einen dagegen gerichteten Antikörper nachgewiesen. Elisa ist der beliebteste enzymgebundene Immunosorbent-Assay, der in Labors verwendet wird. Andererseits ist Elispot ein enzymgebundener Immunadsorptionstest, der nicht anstelle von Elisa verwendet wird, sondern in Labors zusätzlich zu Elisa verwendet wird.
Was ist der Elisa-Assay?
Elisa ist ein Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, der die Gesamtkonzentration sekretierter Signalproteine bestimmt. Es ist ein weit verbreiteter analytischer biochemischer Assay, der erstmals 1971 von Engvall und Perlmann beschrieben wurde. Diese Technik verwendet einen Festphasen-Enzymimmunoassay, um das Vorhandensein eines spezifischen Proteins in einer flüssigen Probe unter Verwendung von Antikörpern nachzuweisen, die gegen dieses spezifische Protein gerichtet sind. Dieser Assay ist ein häufig verwendetes diagnostisches Werkzeug in der Medizin, Pflanzenpathologie und Biotechnologie.
Mechanismus des ELISA-Tests
Bei den meisten ELISA-Tests wird zu Beginn eine unbekannte Menge Antigen auf einem festen Träger (Mikroliterplatte) immobilisiert. Dann wird der passende primäre Antikörper auf die Oberfläche des festen Trägers aufgetragen. Dieser Antikörper bildet mit dem Antigen einen Komplex (Antigen-Antikörper-Komplex). Der Antigen-gebundene primäre Antikörper kann durch einen sekundären Antikörper nachgewiesen werden, der durch Biokonjugation mit einem Enzym verbunden ist. Im letzten Schritt des Elisa-Tests wird eine Substanz zugegeben, die das Substrat des Enzyms enthält. Wenn es eine richtige Bindung eines primären Antikörpers an das Antigen gibt, wird eine nachweisbare Farbänderung durch das Substrat erzeugt. Letztendlich wird dadurch das Antigen in der Probe quantifiziert.
Abbildung 01: Verschiedene Elisa-Typen
Darüber hinaus gibt es verschiedene Herangehensweisen an Elisa, wie direkte Elisa und indirekte Elisa. Derzeit werden verschiedene Elisa-Tests verwendet, um menschliche Krankheitserreger wie Mycobacterium tuberculosis, Rotavirus, Hepatitis-B-Virus, Hepatitis-C-Virus, Enterotoxin-produzierende E.coli, HIV und SARS-CoV-2 nachzuweisen.
Was ist der Elispot-Assay?
Elispot ist ein enzymgebundener Immunosorbent-Assay, der einzelne Zytokin-sezernierende Zellen nachweist. Cecil Czerkinsky beschrieb ELISpot erstmals 1983. Es ist eine Art von Assay, der sich auf die quantitative Messung der Häufigkeit der Zytokinsekretion für eine einzelne Zelle konzentriert. Es wird auch als eine Technik klassifiziert, die Antikörper verwendet, um einen biologischen oder chemischen Proteinanalyten nachzuweisen. Der Fluorospot-Assay ist eine Variation des Elispot-Assays, der Fluoreszenz verwendet, um mehrere Analyten (mehr geheimnisvolle Proteine) zu analysieren.
Mechanismus des Elispot-Tests
Bei diesem Mechanismus werden zunächst Zytokin-spezifische monoklonale Antikörper in die Vertiefungen der Mikroliterplatten gegeben. Dann werden die gewünschten zu beobachtenden Zellen in die Vertiefungen gegeben. Später werden die Zellen inkubiert. Während der Zellinkubation können die Zellen auf beliebige Stimuli reagieren und Zytokine sezernieren. Die von den inkubierten Zellen sezernierten Zytokine lagern sich an die Antikörper an, da die Zellen von zytokinspezifischen monoklonalen Antikörpern umgeben sind.
Abbildung 02: Elispot-Assay
Um diese zytokinspezifischen monoklonalen Antikörper nachzuweisen, werden der Vertiefung biotinylierte spezifische Nachweisantikörper zugesetzt. Biotinylierte spezifische Nachweisantikörper fangen die Zytokin-spezifischen monoklonalen Antikörper in den Vertiefungen ein. Außerdem werden Streptavidin-Enzym-Konjugate in die Wells gegeben, um mit den Detektionsantikörpern zu binden. Im letzten Schritt werden den Wells spezifische Substrate zugesetzt. Die Reaktionen von Enzymkonjugaten und Substraten erzeugen deutliche Flecken in den Vertiefungen. Diese unterschiedlichen Spots werden auf einem automatisierten ELISpot-Lesegerät gelesen. Letztendlich wird dies die Häufigkeit der Zytokinsekretion weiter berechnen.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Elisa und Elispot?
- Beide sind enzymgebundene Immunosorbent-Assays.
- Beide Assays weisen spezifische Proteinanalyten nach.
- Diese Assays verwenden spezifische Antikörper, um die Proteinanalyten zu identifizieren.
- Beide Assays verwenden Enzyme und Substrate.
- Sie werden als diagnostisches Hilfsmittel in medizinischen Labors eingesetzt.
Was ist der Unterschied zwischen Elisa und Elispot?
Elisa ist ein Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, der die Gesamtkonzentration sekretierter Signalproteine bestimmt. Auf der anderen Seite ist Elispot ein enzymgebundener Immunosorbent-Assay, der einzelne Zytokin-sekretierende Zellen misst. Das ist also der Hauptunterschied zwischen Elisa und Elispot. Außerdem wird beim Elisa-Test das Antigen zunächst auf den Mikroliter-Wells immobilisiert. Im Gegensatz dazu wird beim Elispot-Test der Antikörper zunächst auf den Mikroliter-Wells immobilisiert. Dies ist also ein weiterer Unterschied zwischen Elisa und Elispot.
Die folgende Infografik zeigt eine detaillierte Analyse der Unterschiede zwischen Elisa und Elispot in tabellarischer Form.
Zusammenfassung – Elisa gegen Elispot
Elisa und Elispot sind zwei enzymgebundene Immunosorbent-Assays, die in der Medizin, Pflanzenpathologie, Biotechnologie und verschiedenen pharmazeutischen Industrien weit verbreitet sind. Elisa weist das Vorhandensein eines Liganden (Protein) in einer flüssigen Probe anhand von Antikörpern nach, die gegen den zu messenden Liganden gerichtet sind. Der Elispot-Assay ist eine weit verbreitete Methode zur Überwachung von Immunantworten. Es erkennt einzelne Zytokin-sezernierende Zellen mithilfe von Antikörpern. Es ist sowohl eine Immunoassay- als auch eine Bioassay-Technik. Dies ist also die Zusammenfassung des Unterschieds zwischen Elisa und Elispot.
