Der Hauptunterschied zwischen dem BCA- und dem Bradford-Assay besteht darin, dass der BCA-Assay zeitaufwändig und weniger genau ist, während der Bradford-Assay schnell und genau ist.
BCA- und Bradford-Assay sind zwei Assay-Methoden zur Bestimmung der Proteinkonzentration. Diese beiden Tests haben unterschiedliche Testprinzipien und Unterschiede in ihrer Genauigkeit.
Was ist ein BCA-Assay?
BCA-Assay oder Bicinchoninsäure-Assay ist ein biochemischer Assay, der zur Bestimmung der Gesamtproteinkonzentration in einer Lösung nützlich ist. Diese Methode wird nach ihrem Erfinder Paul K. Smith auch als Smith-Assay bezeichnet. Diese Analysemethode weist Ähnlichkeiten mit dem Lowry-Proteinassay, dem Bradford-Proteinassay oder dem Biuret-Reagenz auf. Wir können die Gesamtproteinkonzentration in einer bestimmten Probe durch eine Farbänderung der Probenlösung beobachten, die von grün nach violett geht. Diese Farbänderung erfolgt proportional zum Proteingeh alt. Danach können wir eine kolorimetrische Technik verwenden, um die Farbintensität und den Proteingeh alt in der Probe zu analysieren.
BCA-Methode zur Proteinschätzung
Wenn man den Mechanismus des BCA-Assays betrachtet, enthält die typische BCA-Lösung eine stark alkalische Lösung mit einem pH-Wert von fast etwa 11,25, und die Inh altsstoffe dieser Lösung umfassen Bicinchoninsäure, Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Natriumtartrat und Kupfer(II)sulfat-Pentahydrat. Dieser Assay hängt hauptsächlich von zwei chemischen Reaktionen ab: der Reduktion von Kupfer(II) zu Kupfer(I) durch die Peptidbindungen im Protein und der Chelatbildung von zwei Molekülen Bicinchoninsäure mit Kupfer(I)-Ionen, was zu einem violett gefärbten Komplex führt, der dies kann absorbieren Licht bei 562 nm Wellenlänge. Bei der ersten Reaktion ist die durch Peptidbindungen reduzierte Kupfer(II)-Menge proportional zur Proteinmenge in der Probe.
Was ist der Bradford-Assay?
Bradford-Assay ist eine spektroskopische Analysemethode, die zur Messung der Proteinkonzentration in einer Lösung nützlich ist. Diese Methode wurde 1976 von Marion M. Bradford entwickelt und ist eine vergleichsweise schnelle und genaue Methode.
Farbreaktion von Protein und Bradford-Reagenz
Wir können diese Methode verwenden, um die Konzentration der Proteinmenge in einer Probe zu bestimmen. Die chemische Reaktion, die während dieses Assays in der Probe stattfindet, hängt ausschließlich von der Aminosäurezusammensetzung des Proteins in der Probe ab.
Bradford-Methode zur Proteinschätzung
Wenn man die Methode dieses Assays betrachtet, handelt es sich um einen kolorimetrischen Proteinassay, der auf der Absorptionsverschiebung des Farbstoffs namens Coomassie Brilliant Blue G-250 basiert. Im Allgemeinen existiert dieser Farbstoff in drei Formen als anionische (blaue) Form, neutrale (grüne) Form und kationische (rote) Form. Daher ändert der Farbstoff unter sauren Bedingungen seine Farbe von rot nach blau. Dies liegt an der Bindung des Proteins an den Farbstoff. Gibt es dagegen kein Protein, das an den Farbstoff gebunden werden kann, tritt die Farbänderung nicht auf, die Lösung nimmt eine rotbraune Farbe an. Dieser Farbstoff ist in der Lage, durch Van-der-Waal-Kräfte und elektrostatische Anziehungen einen starken, nichtkovalenten Komplex mit der Carboxylgruppe des Proteins zu bilden.
Was ist der Unterschied zwischen BCA- und Bradford-Assay?
BCA- und Bradford-Assay sind zwei Assay-Methoden zur Bestimmung der Proteinkonzentration. Diese beiden Assays haben unterschiedliche Assay-Prinzipien und Unterschiede in ihrer Genauigkeit. Der Hauptunterschied zwischen dem BCA- und dem Bradford-Assay besteht darin, dass der BCA-Assay zeitaufwändig und weniger genau ist, während der Bradford-Assay schnell und genau ist.
Die folgende Infografik fasst die Unterschiede zwischen BCA- und Bradford-Assay in tabellarischer Form zusammen.
Zusammenfassung – BCA vs. Bradford Assay
BCA-Assay oder Bicinchoninsäure-Assay ist ein biochemischer Assay, der zur Bestimmung der Gesamtproteinkonzentration in einer Lösung nützlich ist. Der Bradford-Assay ist ein spektroskopisches Analyseverfahren, das zur Messung der Proteinkonzentration in einer Lösung nützlich ist. Der Hauptunterschied zwischen BCA- und Bradford-Assay besteht darin, dass BCA zeitaufwändig und weniger genau ist, während Bradford-Assay schnell und genau ist.
