Der Hauptunterschied zwischen Hefe-Eins-Hybrid und Hefe-Zwei-Hybrid besteht darin, dass Hefe-Eins-Hybrid ein In-vitro-basierter Assay zur Analyse von DNA-Protein-Wechselwirkungen ist, während Hefe-Zwei-Hybrid ein In-vitro-basierter Assay zur Analyse von Protein-Protein-Wechselwirkungen ist.
Das Studium der Wechselwirkungen zwischen zellulären Molekülen kann helfen, Erkennungsstellen zu definieren, die an der Genexpression und den Proteinwegen beteiligt sind. DNA- und Protein-Wechselwirkungen sind integraler Bestandteil zellulärer Prozesse wie DNA-Modifikationen und Transkriptionsregulation usw. Andererseits spielen Protein- und Protein-Wechselwirkungen entscheidende Rollen in zellulären Prozessen wie Replikation, Transkription, Translation und Sign altransduktion. Daher ist es von entscheidender Bedeutung, diese Wechselwirkungen von Zellmolekülen durch verschiedene Assays zu identifizieren. Yeast One Hybrid und Yeast Two Hybrid sind zwei In-vitro-basierte Assays zur Analyse von DNA-Protein- und Protein-Protein-Wechselwirkungen.
Was ist Yeast One Hybrid?
Yeast One Hybrid (Y1H) ist ein In-vitro-basierter Assay zur Analyse intrazellulärer DNA-Protein-Wechselwirkungen. Diese Methode wurde erstmals 1993 von Wang und Reed eingeführt. Seitdem hat sie eine größere Kraft in der biologischen Forschung gezeigt. In diesem Assay gibt es zwei Hauptkomponenten: DNA-Köder und Proteinbeute.
Abbildung 01: Yeast One Hybrid
Bei dem Verfahren wird zunächst eine DNA-Sequenz (DNA-Köder) vor zwei verschiedene Reporter (HIS3, LacZ) kloniert. Diese Reporterkonstrukte werden in das Genom eines Hefestamms integriert. Transkriptionsfaktoren werden als Proteinbeute genommen. Transkriptionsfaktoren werden mit der Transkriptionsaktivierungsdomäne (AD) des Hefe-Gal4-Transkriptionsfaktors fusioniert, um Hybridproteine herzustellen. Dieses gesamte Hybridprotein wird in ein Plasmid integriert, bevor es in den Hefestamm eingebracht wird. Nach der Einführung des rekombinanten Plasmids, wenn der Transkriptionsfaktor mit dem DNA-Fragment interagiert, aktiviert die AD-Einheit die Reportergenexpression (HIS3 oder LacZ). Die Sequenzierung der Plasmide ermöglicht die Identifizierung des Transkriptionsfaktors, der an das DNA-Fragment binden kann. Kürzlich wurde die Hefe-Ein-Hybrid-Methode zur Erforschung der Krankheitsdiagnose verwendet. Daher wird dieser Test in Zukunft in größerem Umfang in der wissenschaftlichen Forschung und bei medizinischen Behandlungen eingesetzt.
Was ist Yeast Two Hybrid?
Yeast two hybrid (Y2H) ist ein In-vitro-basierter Assay zur Analyse von intrazellulären Protein- und Proteinwechselwirkungen. Diese Methode wurde ursprünglich 1989 von Stanley Fields und Ok-Kyu Song entwickelt. Diese Technik erkennt Protein-Protein-Wechselwirkungen unter Verwendung des Gal4-Transkriptionsfaktors der Hefe.
Abbildung 02: Yeast Two Hybrid
Bei diesem Verfahren werden zunächst zwei Fusionen (Hybride) unter Verwendung von interessierenden Proteinen konstruiert: durch Fusion eines Proteins mit der DNA-Bindungsdomäne (DBD) und durch Fusion des anderen Proteins mit der Aktivatordomäne (AD) des Gal4-Transkriptionsfaktors. Das mit DBD fusionierte Protein ist als Köder bekannt, während das mit AD fusionierte Protein als Beute bekannt ist. Im Hefestamm werden bei der Wechselwirkung von Köder und Beute DBD und AD in enge Nähe gebracht, um einen funktionellen Gal4-Transkriptionsfaktor stromaufwärts des Reportergens zu erzeugen. Der funktionelle Transkriptionsfaktor aktiviert die Reportergenexpression. Darüber hinaus wird diese Methode derzeit verwendet, um die Wechselwirkungen von integralen Membranproteinen in Säugetierzellen zu untersuchen.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Yeast One Hybrid und Yeast Two Hybrid?
- Yeast One Hybrid und Yeast Two Hybrid sind zwei In-vitro-basierte Assays zur Analyse von DNA-Protein- und Protein-Protein-Wechselwirkungen.
- Diese Assays verwenden Hefestämme.
- Beide Assays verwenden die Aktivierungsdomäne (AD) des Transkriptionsfaktors Gal4.
- Sie verwenden die Reportergen-Expression (HIS3 oder LacZ), um Interaktionen zu erkennen.
- Sie haben Köder und Beute.
- Beide Assays sind in der modernen biologischen Forschung sehr nützlich.
Was ist der Unterschied zwischen Yeast One Hybrid und Yeast Two Hybrid?
Yeast One Hybrid ist ein In-vitro-basierter Assay zur Analyse von DNA- und Proteininteraktionen, während Yeast Two Hybrid ein In-vitro-basierter Assay zur Analyse von Protein- und Proteininteraktionen ist. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen Hefe-Eins-Hybrid und Hefe-Zwei-Hybrid. Darüber hinaus ist der Köder im Hefe-Eins-Hybrid ein DNA-Fragment und die Beute ein Proteinmolekül. Andererseits sind in Hefe-Zwei-Hybriden sowohl Köder als auch Beute Proteinmoleküle.
Die folgende Infografik listet die Unterschiede zwischen Hefe-Eins-Hybrid und Hefe-Zwei-Hybrid in tabellarischer Form zum direkten Vergleich auf.
Zusammenfassung – Yeast One Hybrid vs. Yeast Two Hybrid
Yeast One Hybrid und Yeast Two Hybrid sind zwei wichtige in-vitro-basierte Assays. Hefe-Eins-Hybrid ist ein in-vitro-basierter Assay zur Analyse von DNA- und Protein-Interaktionen, während Hefe-Zwei-Hybrid ein in-vitro-basierter Assay zur Analyse von Protein- und Protein-Interaktionen ist. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen Hefe-Eins-Hybrid und Hefe-Zwei-Hybrid.
