Der Hauptunterschied zwischen der Coomassie- und der Silberfärbung besteht darin, dass die Coomassie-Färbung eine Protein-Färbetechnik ist, die eine Coomassie-Brillantblau-Färbung verwendet, während die Silber-Färbung eine Protein-Färbetechnik ist, die eine Silberfärbung verwendet.
Proteintrennung und -identifizierung sind entscheidende Schritte in der Proteomanalyse. Sie benötigen eine hochauflösende Proteincharakterisierung nach der Gelelektrophorese. Es gibt zahlreiche Färbetechniken, die verschiedene Farbstoffe wie anionische Farbstoffe (Coomassie Brilliant Blue), Metallkationen (Imidazol-Zink), Silberfarbstoffe und fluoreszierende Farbstoffe usw. umfassen. Manchmal können auch radioaktive Sonden verwendet werden. Die Wahl der Färbetechnik hängt von der Einfachheit, der Verfügbarkeit von Bildgebungsgeräten im Labor usw. ab.
Was ist Coomassie-Färbung?
Coomassie-Färbung ist eine Protein-Färbetechnik, die eine Coomassie-Brillantblau-Färbung verwendet. Sie wird allgemein als Coomassie-Blau-Technik bezeichnet. Coomassie Brilliant Blue ist der beliebteste anionische Proteinfarbstoff. Dieser Farbstoff färbt normalerweise fast alle Proteine mit guter quantitativer Linearität bei mittlerer Empfindlichkeit. Coomassie-Brillantblau-Färbemittel bindet unspezifisch an fast alle Proteine. Es gibt zwei verschiedene Coomassie-Brillantblau-Färbevarianten: R-250 und G-250. R-250 bietet kürzere Färbezeiten, während G-250 in empfindlicheren und umweltfreundlicheren Formulierungen erhältlich ist.
Abbildung 01: Coomassie-Färbung
Coomassie-Farbstoffe sind sehr beliebt in Massenspektrometriestudien und Studien zur Proteinidentifizierung. Darüber hinaus ist die biosichere Coomassie-Färbung eine ungefährliche Formulierung von Coomassie-Blau G-250, die derzeit auf dem Markt erhältlich ist. Der Vorteil dieser Formulierung besteht darin, dass nur Wasser zum Spülen und Entfärben benötigt wird. Die biosichere Coomassie-Färbung bietet eine Empfindlichkeit, die der von herkömmlichem Coomassie-Blau G-250 entspricht, aber besser als die Coomassie-Färbung R-250 ist. Darüber hinaus verfügt es über ein einfacheres und schnelleres Färbeprotokoll als das herkömmliche Coomassie-Blau G-250. Der Nachteil der Coomassieblau-Färbung ist, dass sie im Vergleich zur Silberfärbung weniger empfindlich ist. Die Färbung mit Coomassie-Blau ist etwa 50-mal weniger empfindlich als die Färbung mit Silber. Aufgrund seiner einfachen Bindung wird es jedoch in vielen Studien bevorzugt.
Was ist Silberfärbung?
Silberfärbung ist eine Proteinfärbetechnik, die eine Silberfärbung verwendet. Silberfärbung wird verwendet, um sowohl Agarose- als auch Polyacrylamidgele zu färben. Die Silberfärbung von Proteinen in Agarosegelen wurde erstmals 1973 von Kerenyi und Gallyas entwickelt. Später wurde es für Proteine in Polyacrylamidgelen angepasst, die in SDS-PAGE verwendet werden. Derzeit wird die Silberfärbung auch zum Färben von DNA oder RNA verwendet. Um die Gele anzufärben, werden die Gele bei diesem Verfahren mit Silbernitratlösung inkubiert. Die Silberfärbung färbt die Stellen, an denen Proteine vorhanden sind, von braun nach schwarz.
Abbildung 02: Silberfärbung
Die Intensität der Silberfärbung hängt von der Primärstruktur des Proteins ab. Auch die Sauberkeit der verwendeten Gefäße und die Reinheit der Reagenzien können die Qualität der Silberfärbung beeinflussen. Der Nachteil der Silberfärbung besteht jedoch darin, dass nicht alle Proteine nachgewiesen werden können, insbesondere Glykoproteine und Proteine mit großen modifizierten Gruppen an ihren Seitenketten.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Coomassie- und Silberfärbung?
- Coomassie- und Silberfärbung sind zwei Techniken, die bei der Proteinfärbung verwendet werden.
- Sie können sowohl Proteine als auch DNA färben.
- Beide Färbetechniken haben Nachteile.
- Diese Techniken haben ähnliche Schritte, wie Fixieren, Färben und Entfärben.
Was ist der Unterschied zwischen Coomassie- und Silberfärbung?
Coomassie-Färbung ist eine Protein-Färbetechnik, die Coomassie-Brillantblau-Färbung verwendet, während die Silber-Färbung eine Protein-Färbetechnik ist, die Silber-Färbung verwendet. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen Coomassie- und Silberfärbung. Darüber hinaus ist die Coomassie-Färbung weniger empfindlich als die Silberfärbung.
Die folgende Infografik listet die Unterschiede zwischen Coomassie- und Silberfärbung in tabellarischer Form zum direkten Vergleich auf.
Zusammenfassung – Coomassie vs. Silberfärbung
Um Proteine sichtbar zu machen, kann eine proteinspezifische farbstoffbindende oder farbgebende chemische Reaktion durchgeführt werden. Dies wird als Proteinfärbung bezeichnet. Coomassie- und Silberfärbung sind zwei Techniken, die bei der Proteinfärbung verwendet werden. Die Coomassie-Färbetechnik verwendet Coomassie-Brillantblau-Färbung, während die Silberfärbung Silber-Färbung verwendet. Das ist also der Hauptunterschied zwischen Coomassie- und Silberfärbung.
