Der Hauptunterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie besteht darin, dass die Gelfiltrationschromatographie von den Unterschieden im Molekulargewicht oder der Größe der Analytprobe abhängt, während die Affinitätschromatographie von der Affinität eines Analyten zu einem immobilisierten Liganden abhängt.
Der Begriff Chromatographie in der analytischen Chemie bezeichnet den Prozess der Trennung von Komponenten in einem Gemisch unter Verwendung verschiedener Techniken. Chromatographie ist ein Sammelbegriff, der für eine Vielzahl unterschiedlicher Trennmethoden steht.
Was ist Gelfiltrationschromatographie?
Gelfiltrationschromatographie ist eine Analysetechnik, bei der die Trennung von Komponenten vom Unterschied im Molekulargewicht oder der Größe abhängt. Diese Technik ist auch als Größenausschlusschromatographie oder Molekularsiebchromatographie bekannt. Die Trenntechnik bei diesem Verfahren hängt von der unterschiedlichen Fähigkeit der Moleküle in der Probe ab, in die Poren des Gelfiltrationsmediums einzudringen.
Bei der Gelfiltrationstechnik enthält die stationäre Phase Kügelchen aus hydratisiertem, schwammartigem Material mit Poren von molekularen Abmessungen, die einen engen Größenbereich enth alten. Wenn wir eine wässrige Lösung, die aus Molekülen unterschiedlicher Größe besteht, durch eine Säule leiten, die diese „Molekularsiebe“enthält, bewegen sich die Moleküle, die größer als die Poren des Filtermediums sind, schnell durch die Säule. Im Gegensatz dazu dringen die kleineren Moleküle in die Poren des Gels ein und neigen dazu, sich langsam durch die Säule zu bewegen. Die Moleküle werden in der Reihenfolge abnehmender Molekülgröße aus der Säule eluiert. Hier ist die Ausschlussgrenze des Gels die Molekülmasse der kleinsten Moleküle, die nicht in die Poren eines gegebenen Gels eindringen können.
Es gibt verschiedene Arten von Gelfiltrationstechniken, wie z. B. die indirekte Gelfiltrationsmethode, Steady-State-Gelfiltration, Gelperlendialyse usw. Die indirekte Gelfiltrationschromatographie ist bei der Bestimmung freier Schilddrüsenhormone nützlich. Die Steady-State-Gelfiltrationschromatographie ist eine indirekte Technik, die hauptsächlich zur Messung freier Steroide wie Cortisol, Testosteron usw. nützlich ist. Die Gelperlendialyse hingegen ist eine Modifikation der Steady-State-Gelfiltration, die vergleichsweise einfacher ist.
Was ist Affinitätschromatographie?
Affinitätschromatographie ist eine Analysetechnik und eine Trennmethode, die von einer spezifischen Bindungswechselwirkung zwischen einem immobilisierten Liganden und seinem Bindungspartner abhängt. Einige Beispiele umfassen Antikörper-Antigen-Bindung, Enzym-Substrat-Bindung und Enzym-Inhibitor-Bindung. Daher hat diese Technik viele wichtige Anwendungen in der Nukleinsäurereinigung, Proteinreinigung aus Zellextrakten und Reinigung aus Blut.
Bei dieser Technik ist die wichtigste Eigenschaft die Ligandenimmobilisierung. Hierfür können wir verschiedene Materialien wie Acrylate und Kieselgel verwenden. Es ist wichtig, eine sterische Interferenz des Zielmoleküls mit dem Liganden zu verhindern. Außerdem ist an die Festphase ein Inhibitor gebunden. Wir nennen diesen Inhibitor einen Spacer. Klassischerweise besteht ein Spacer aus einer Kohlenwasserstoffkette.
Die stationäre Phase der Affinitätschromatographie enthält Kern, Spacer und Ligand. Manchmal hat es auch ein Metallion, das an den Liganden gekoppelt ist. Die am meisten bevorzugte feste Phase für die stationäre Phase bei dieser Technik ist Agarosegel, da es leicht zum Füllen und Packen der Säule mit Harzbetten beliebiger Größe abgegeben werden kann und groß genug ist, damit Biomoleküle ungehindert in und durch die Kügelchen fließen können. Die Liganden können auf verschiedene Weise kovalent an das Perlpolymerisat anlagern. Die gebräuchlichsten Spacer-Verbindungen sind Bromcyan, Epoxid, Epoxid mit C6-Säure und Diamin. Andererseits unterscheiden sich die Liganden, die wir verwenden können, je nach Ziel, z. B. Antikörper-Antigen, Eisen- oder Aluminiumionen-Phosphoproteine, Avidin-Biotin, Glutathion-GST, Chelator-His-markierte Proteine usw.
Was ist der Unterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie?
Chromatographie ist eine wichtige Analysetechnik. Gelfiltrationschromatographie und Affinitätschromatographie sind zwei wichtige Variationen der Chromatographie. Der Hauptunterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie besteht darin, dass die Gelfiltrationschromatographie von den Unterschieden im Molekulargewicht oder der Größe der Analytprobe abhängt, während die Affinitätschromatographie von der Affinität eines Analyten zu einem immobilisierten Liganden abhängt.
Zusammenfassung – Gelfiltration vs. Affinitätschromatographie
Es gibt je nach Anwendung und Art der Analytprobe verschiedene Arten von Chromatographietechniken. Gelfiltration und Affinitätschromatographie sind zwei solche Techniken. Der Hauptunterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie besteht darin, dass die Gelfiltrationschromatographie von den Unterschieden im Molekulargewicht oder der Größe der Analytprobe abhängt, während die Affinitätschromatographie von der Affinität eines Analyten zu einem immobilisierten Liganden abhängt.
