Hauptunterschied – Immunfluoreszenz vs. Immunhistochemie
Krankheitsdiagnostik, die molekularbiologische Methoden verwendet, hat sich zu einem aufstrebenden Bereich der klinischen Labortechnik entwickelt. Es umfasst alle Tests und Methoden, um eine Krankheit zu identifizieren und die Ursache einer Krankheit zu verstehen, indem DNA, RNA oder exprimierte Proteine in einem Organismus analysiert werden. Schnelle Fortschritte in der Molekulardiagnostik haben die Grundlagenforschung zu übertragbaren und nicht übertragbaren Krankheiten ermöglicht. Diese werden verwendet, um Veränderungen in der Sequenz oder in Expressionsniveaus in entscheidenden Genen oder Proteinen zu bestimmen, die an Krankheiten beteiligt sind. Immunfluoreszenz (IF) und Immunhistochemie (IHC) sind zwei solche weit verbreitete Techniken in der Krebsbiologie. IF ist eine Art von IHC, bei der ein Fluoreszenznachweisverfahren verwendet wird, um monoklonale und polyklonale Antikörper zu analysieren, während IHC Methoden auf chemischer Basis verwendet, um die monoklonalen und polyklonalen Antikörper nachzuweisen. Dies ist der Hauptunterschied zwischen IF und IHC.
Was ist Immunfluoreszenz (IF)?
Immunfluoreszenz ist eine Nachweistechnik, bei der die im Assay verwendeten Antikörper zum Nachweis mit fluoreszierenden Farbstoffen oder fluoreszierenden Proteinen markiert werden. Markierte Sekundärantikörper können zu unerwünschten Hintergrundsignalen führen; Daher basiert die IF-Technik derzeit auf der Markierung des primären Antikörpers selbst, um unerwünschte Signale während des Nachweises zu vermeiden. Durch diese Technik wird eine unspezifische Bindung zwischen dem primären und dem sekundären Antikörper verhindert, und sie ist schneller, da kein sekundärer Inkubationsschritt erforderlich ist. Auch die Datenqualität wird verbessert.
Abbildung 01: Doppelte Immunfluoreszenzfärbung für BrdU, NeuN und GFAP
Fluorochrome oder Fluoreszenzfarbstoffe sind Verbindungen, die Strahlung, vorzugsweise angeregte ultraviolette Strahlung, absorbieren können. Wenn die Teilchen aus dem angeregten Zustand den Grundzustand erreichen, emittieren sie Strahlung, die von einem Detektor eingefangen und detektiert wird, um ein Spektrum zu bilden. Es ist von großer Bedeutung, dass die fluoreszierende Markierung für die jeweilige Reaktion kompatibel und stabil ist und dass sie richtig an den Antikörper konjugiert sein sollte, um genaue Ergebnisse zu erh alten. Eines der am häufigsten verwendeten Fluorochrome ist Fluoresceinisothiocyanat (FITC), das eine grüne Farbe hat und Absorptions- und Emissionsspitzenwellenlängen von 490 nm bzw. 520 nm aufweist. Rhodamin, ein weiteres Mittel, das bei IF verwendet wird, hat eine rote Farbe und deutliche Absorptions- und Emissionsspitzenwellenlängen von 553 nm und 627 nm.
Was ist Immunhistochemie (IHC)?
IHC ist eine molekulare Testmethode, die praktiziert wird, um das Vorhandensein des Antigens in der Zielzelle zu identifizieren und zu bestätigen. Die Zielzelle könnte ein infektiöses Partikel, ein mikrobielles Pathogen oder eine bösartige Tumorzelle sein. IHC verwendet monoklonale und polyklonale Antikörper, um das Vorhandensein von Antigenen zu bestimmen, die auf der Zelloberfläche der Zielzellen vorhanden sind. Die Technik basiert auf der Antigen-Antikörper-Bindung. An diese Antikörper wird ein Nachweismarker konjugiert, um die An- oder Abwesenheit des jeweiligen Antigens nachzuweisen. Diese Marker können chemische Marker wie Enzyme, fluoreszierend markierte Antikörper oder radiomarkierte Antikörper sein.
Abbildung 02: Immunhistochemisch gefärbter Mäusehirnschnitt
Die beliebteste Anwendung von IHC ist die Krebszellbiologie, um das Vorhandensein bösartiger Tumore zu identifizieren, aber es wird auch zum Nachweis von Infektionskrankheiten verwendet.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Immunfluoreszenz und Immunhistochemie?
- Immunfluoreszenz und Immunhistochemie finden unter in vitro Bedingungen statt.
- Beide Techniken basieren auf dem Antigen-Antikörper
- Beides sind sehr schnelle Techniken.
- Ergebnisse der Techniken sind reproduzierbar.
- Beide haben eine verbesserte Datenqualität.
- Diese Techniken werden in der Diagnostik von Krebs und Infektionskrankheiten eingesetzt.
Was ist der Unterschied zwischen Immunfluoreszenz und Immunhistochemie?
Immunfluoreszenz vs. Immunhistochemie |
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| IF ist eine Nachweistechnik, bei der die im Assay verwendeten Antikörper mit fluoreszierenden Farbstoffen oder fluoreszierenden Proteinen zum Nachweis markiert werden. | IHC ist eine Nachweistechnik, bei der die im Assay verwendeten Antikörper mit Chemikalien oder radioaktiven Elementen zum Nachweis markiert werden. |
| Genauigkeit | |
| Die Genauigkeit ist bei der IF-Technik höher als bei der IHC. | In IHC ist die Genauigkeit geringer. |
| Spezifität | |
| IF ist spezifischer. | IHC ist weniger spezifisch. |
Zusammenfassung – Immunfluoreszenz vs. Immunhistochemie
Molekulare Mechanismen haben viele Veränderungen auf dem Gebiet der Medizin bewirkt und fortschrittliche molekulare Testmethoden hervorgebracht, die Revolutionen auf dem Gebiet der Diagnostik bewirkt haben. Diese Erfindungen haben zu einer schnellen und genauen Identifizierung und Bestätigung der Krankheit geführt und dadurch die erfolgreiche Verabreichung und Herstellung von Arzneimitteln ermöglicht. Diese Techniken werden auch in der Pharmakologie verwendet, um die Angriffspunkte von Arzneimitteln zu finden und die pharmakokinetischen Eigenschaften des Arzneimittels während des Arzneimittelstoffwechsels zu bestätigen. IF und IHC sind zwei diagnostische Methoden, die auf dem Konzept der Antigen- und Antikörperbindung basieren, obwohl sich die Nachweismethode bei beiden Techniken unterscheidet. IF verwendet das Prinzip der Fluoreszenz zum Nachweis des Antigens und IHC verwendet das Konzept der chemischen Konjugation zum Nachweis des Antigens. Dies ist der Unterschied zwischen IF und IHC.
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