Schlüsselunterschied – Forward vs. Reverse Primer
Polymerase-Kettenreaktion (PCR) ist eine DNA-Amplifikationsmethode, die in molekularbiologischen Anwendungen verwendet wird. Es ist eine häufig verwendete Technik, die Millionen bis Milliarden Kopien einer besonders interessanten DNA-Sequenz anfertigt. Es handelt sich um eine In-vitro-Methode, die im Labor durchgeführt wird. Die PCR-Technik ist vollständig von der kommerziell hergestellten DNA-Polymerase namens Taq-Polymerase abhängig. Außerdem erfordert es mehrere andere Komponenten und eine ordnungsgemäße Temperaturh altung. Ein wichtiger Bestandteil sind Grundierungen. Primer sind die kurzen DNA-Sequenzen, die speziell für die Ziel-DNA-Sequenz entwickelt wurden. Sie sind normalerweise etwa 20 Nukleotide lang. Die Taq-Polymerase katalysiert das Hinzufügen von Nukleotiden zu einer bereits bestehenden Nukleotidsequenz. Somit dienen Primer als Ausgangspunkte für die Synthese neuer Stränge. Die Taq-Polymerase arbeitet nur in 5'-3'-Richtung, daher erfolgt die DNA-Synthese in der gleichen 5'-3'-Richtung. Da DNA doppelsträngig ist, werden bei der PCR zwei Arten von Primern benötigt. Sie sind als Forward-Primer und Reverse-Primer bekannt. Vorwärts- und Rückwärts-Primer werden basierend auf der Richtung der Verlängerung des Primers in der DNA bezeichnet, wenn die DNA-Synthese stattfindet. Der Forward-Primer anne alt mit dem Antisense-DNA-Strang und initiiert die Synthese des +ve-Strangs des Gens in 5'- bis 3'-Richtung. Reverse-Primer hybridisiert mit dem Sense-Strang und initiiert die Synthese des komplementären Strangs des codierenden Strangs; das ist –ve den Strang des Gens in 5’to 3’-Richtung. Dies ist der Hauptunterschied zwischen Forward- und Reverse-Primern.
Was ist ein Forward Primer?
Vorwärtsorientierung ist die Synthese des codierenden Strangs oder des Sense-Strangs eines Gens. Die Taq-Polymerase katalysiert die Synthese eines neuen Strangs in 5’- bis 3’-Richtung. Die Synthese des kodierenden Strangs erfolgt, wenn der Primer mit dem nichtkodierenden oder dem Antisense-Strang anlagert und sich in 5’- bis 3’-Richtung verlängert.
Abbildung 01: Forward- und Reverse-Primer
Der Primer, der sich mit dem Antisense-Strang oder dem nichtkodierenden Strang oder dem Matrizenstrang verbindet, wird als Vorwärtsprimer bezeichnet, da der Vorwärtsprimer als Ausgangspunkt für die Synthese des kodierenden oder des positiven Strangs des Gens dient. Der Forward-Primer hat eine kurze Nukleotidsequenz, die komplementär zum 3'-flankierenden Ende des Antisense-Strangs ist. Es hybridisiert mit dem Antisense-Strang und erleichtert der Taq-Polymerase das Anfügen von Nukleotiden, die komplementär zum Matrizenstrang sind.
Was ist ein Reverse Primer?
Reverse-Primer ist die kurze DNA-Sequenz, die sich an das 3'-Ende des Sense-Strangs oder des codierenden Strangs anlagert. Reverse Primer dienen als Ausgangspunkt, um einen komplementären Strang der codierenden Sequenz oder der nicht codierenden Sequenz zu synthetisieren. Reverse Primer ist komplementär zum 3'-Ende des codierenden Strangs konzipiert. Daher verbindet es sich mit dem flankierenden 3'-Ende des codierenden Strangs und ermöglicht der Taq-Polymerase, den Antisense-Strang oder den Matrizenstrang zu synthetisieren. Da seine Orientierung umgekehrt ist, wird dieser Primer als reverser Primer bezeichnet.
Sowohl Reverse- als auch Forward-Primer sind wichtig für die Produktion von Millionen bis Milliarden von Kopien bestimmter DNA-Regionen, die gezielt oder interessiert sind.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Forward- und Reverse-Primer?
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer werden aus Oligonukleotiden hergestellt.
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer besitzen kurze Nukleotidsequenzen, die komplementär zu den flankierenden Enden der DNA-Doppelstränge sind.
- Forward- und Reverse-Primer bestehen normalerweise aus 20 Nukleotiden.
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer werden in Polymerase-Kettenreaktionen verwendet.
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer werden kommerziell synthetisiert.
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer sind temperaturstabil und haben normalerweise ähnliche Tm.
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer werden mit den Ziel-DNA-Sequenzen hybridisiert.
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer werden gemäß den PCR-Reaktionen entworfen.
- Sowohl Forward- als auch Reverse-Primer dienen als Startpunkte für die DNA-Amplifikation.
- Sowohl Reverse- als auch Forward-Primer sind wichtig für die Produktion von Millionen Kopien bestimmter Regionen gezielter oder interessierter DNA-Sequenzen.
Was ist der Unterschied zwischen Forward- und Reverse-Primer?
Forward-Primer vs. Reverse-Primer |
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| Forward-Primer ist die kurze DNA-Sequenz, die mit dem 3'-Ende des nichtkodierenden oder des Matrizenstrangs des Gens hybridisiert und als Ausgangspunkt für die Synthese der kodierenden Sequenz dient. | Reverse-Primer ist die kurze DNA-Sequenz, die mit dem 3'-Ende des kodierenden oder des Nicht-Template-Strangs hybridisiert und als Ausgangspunkt für die Synthese der nichtkodierenden Sequenz dient. |
| Glühstrang | |
| Forward-Primer-Anlagerung mit Template-Strang. | Reverse-Primer annealen mit dem Nicht-Matrizen-Strang. |
| resultierende neue Sequenz | |
| Vorwärtsprimer erleichtert die Synthese der kodierenden Sequenz. | Reverse-Primer erleichtert die Synthese der nichtkodierenden Sequenz. |
Zusammenfassung – Forward vs. Reverse Primer
Es gibt zwei Arten von Primern, die an der PCR-Technik beteiligt sind. Sie sind Vorwärts- und Rückwärtsprimer. Basierend auf der Verlängerung des Primers bei der Synthese neuer DNA-Stränge werden diese Primer markiert oder benannt. Die Taq-Polymerase synthetisiert die neue DNA in 5’- bis 3’-Orientierung. Daher sind Primer als komplementär zu den 3'-Enden der Doppelstränge konzipiert. Vorwärts-Primer, der sich in 5'- bis 3'-Richtung verlängert, hybridisiert mit dem 3'-Ende des Antisense oder der Matrize oder der nicht-codierenden Sequenz. Es dient als Ausgangspunkt, um die codierende Sequenz zu synthetisieren. Rückwärts-Primer, der sich in 5'- bis 3'-Richtung verlängert, hybridisiert mit dem 3'-Ende des codierenden oder des Nicht-Templates oder des Sense-Strangs. Es dient als Ausgangspunkt, um die nichtkodierende Sequenz zu synthetisieren. Dies ist der Unterschied zwischen Forward- und Reverse-Primer.
