Der Hauptunterschied zwischen der Saccharosegradienten- und der Saccharosekissen-Ultrazentrifugation besteht darin, dass bei der Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation ein kontinuierlicher Saccharosegradient verwendet wird, während bei der Saccharosekissen-Ultrazentrifugation ein diskontinuierlicher Saccharosegradient verwendet wird.
Saccharosegradienten- und Saccharosekissen-Ultrazentrifugation sind zwei ähnliche Arten von Techniken, die verwendet werden, um bestimmte Arten von Makromolekülen zu trennen. Bei beiden Techniken wird ein Saccharose-Dichtegradient verwendet. Bei der Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation wird jedoch ein kontinuierlicher Dichtegradient verwendet, während bei der Saccharosekissen-Ultrazentrifugation ein diskontinuierlicher Dichtegradient verwendet wird.
Was ist Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation?
Saccharose-Gradienten-Ultrazentrifugation ist eine Technik, mit der Makromoleküle wie DNA, RNA und Proteine fraktioniert werden können. Es gibt mehrere Schritte in dieser Technik. Sie sind Saccharose-Gradienten-Herstellung, Zentrifugation, Trennung und Elution. Die Gradientenvorbereitung ist der Schlüsselschritt bei dieser Technik. Bei dieser Technik wird die Probe, die Makromoleküle unterschiedlicher Größe enthält, auf die Oberfläche einer Saccharose-Gradientensäule geschichtet. Beim Zentrifugieren sedimentieren unterschiedlich große Makromoleküle mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten durch die Saccharose-Gradientensäule. Die Sedimentation hängt von mehreren Faktoren ab, darunter Zentrifugationskraft, Größe, Form und Dichte der Makromoleküle, Dichte und Viskosität des Gradienten. Am Ende der Zentrifugation werden Makromoleküle räumlich durch Dichte getrennt. Größere Makromoleküle (Makromoleküle hoher Dichte) sedimentieren nach unten. Leichtere (Makromoleküle mit geringer Dichte) bleiben oben auf dem Gradienten. Daher trennen sich die Moleküle als unterschiedliche Banden. Dann sollten die Banden getrennt werden, und die Reinigung des spezifischen Makromoleküls von Saccharose muss erfolgen.
Abbildung 01: Saccharose-Gradienten-Ultrazentrifugation
Auf der Anwendungsseite wird diese Methode häufig zur Fraktionierung von DNA-Molekülen verwendet. Saccharose-Gradienten-Ultrazentrifugation wird üblicherweise verwendet, um Proteinkomplexgröße und -zusammensetzung zu charakterisieren. Darüber hinaus wird diese Technik zur partiellen Aufreinigung von mRNA verwendet.
Was ist Saccharosekissen-Ultrazentrifugation?
Saccharosekissen-Ultrazentrifugation ist eine weitere Technik, die die Fraktionierung von Makromolekülen ermöglicht. Im Gegensatz zur Saccharose-Dichtegradienten-Ultrazentrifugation verwendet die Saccharosekissen-Ultrazentrifugation einen diskontinuierlichen Dichtegradienten. Die Saccharosekonzentration steigt von oben nach unten in diskreten Schritten an. Bei dieser Technik wird die Trennung erreicht, indem der geklärte Extrakt auf ein kleines Volumen einer Saccharoselösung in einem Zentrifugenröhrchen, dem sogenannten Saccharosekissen, gegeben wird. Dies ermöglicht eine bessere Trennung bei der Hochgeschwindigkeitszentrifugation. Wenn sich die Moleküle als Band zwischen dem Saccharosepolster trennen, kann das weiße Band gesammelt und gereinigt werden. Darüber hinaus können Verunreinigungen unter Verwendung des Saccharosekissenverfahrens weiter entfernt werden. Bei der Saccharose-Kissenmethode können 60–70 % des Röhrchens mit der Probe gefüllt werden. Daher ermöglicht die Saccharosekissenmethode die Verarbeitung eines größeren Probenvolumens.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen der Saccharosegradienten- und der Saccharosekissen-Ultrazentrifugation?
- Saccharosegradient und Saccharosekissen-Ultrazentrifugation sind zwei Techniken, die verwendet werden, um eine Mischung von Makromolekülen zu trennen.
- Bei beiden Methoden wird ein Saccharosegradient verwendet.
- Zentrifugation ist ein Schritt in beiden Methoden.
- Die Moleküle sedimentieren bei jeder Methode als Band oder Zone.
Was ist der Unterschied zwischen Saccharosegradienten- und Saccharosekissen-Ultrazentrifugation?
Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation ist eine Technik, die einen kontinuierlichen Saccharosegradienten im Zentrifugenröhrchen verwendet, während die Saccharosekissen-Ultrazentrifugation eine Technik ist, die einen diskontinuierlichen Saccharosegradienten verwendet. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen Saccharosegradienten- und Saccharosekissen-Ultrazentrifugation.
Darüber hinaus ermöglicht die Saccharosekissen-Ultrazentrifugation die Verarbeitung eines größeren Probenvolumens, während die Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation die Verarbeitung eines vergleichsweise geringen Probenvolumens ermöglicht.
Die folgende Infografik listet weitere Unterschiede zwischen der Saccharosegradienten- und der Saccharosekissen-Ultrazentrifugation auf.
Zusammenfassung – Saccharosegradient vs. Saccharosekissen-Ultrazentrifugation
Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation trennt Makromoleküle unter Verwendung eines kontinuierlichen Saccharosegradienten. Im Gegensatz dazu verwendet die Saccharosekissen-Ultrazentrifugation einen diskontinuierlichen Saccharosegradienten, um eine bestimmte Art von Partikeln in einem Gemisch zu trennen. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen Saccharosegradienten- und Saccharosekissen-Ultrazentrifugation. Das Saccharosekissenverfahren ermöglicht das Sammeln von morphologisch intakten Partikeln, da es im Gegensatz zur Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation, die Moleküle auf den Boden des Röhrchens drückt, keine mechanische Belastung verursacht. Darüber hinaus ermöglicht die Saccharosekissen-Ultrazentrifugation die Verarbeitung eines größeren Probenvolumens als die Saccharosegradienten-Ultrazentrifugation.
