Hauptunterschied – Nitrozellulose vs. Nylonmembran
Blotting ist eine wichtige Technik zum Nachweis spezifischer Sequenzen von DNA, RNA und Proteinen aus ihren Mischungen in der Molekularbiologie. Es wird mit einer Membran namens Blot durchgeführt. Es gibt verschiedene Blotting-Techniken wie Northern, Southern und Western Blotting. Die Auswahl einer geeigneten Membran für den Blotting-Prozess sollte sorgfältig erfolgen, um eine unspezifische Bindung und falsche Nachweise zu vermeiden. Nitrozellulose, Nylon und PVDF sind häufig verwendete Membranen in Blotting-Techniken. Sie haben unterschiedliche Eigenschaften. Der Hauptunterschied zwischen Nitrocellulose- und Nylonmembranen besteht darin, dass Nitrocellulosemembranen ein hohes Proteinimmobilisierungspotential aufweisen, während Nylonmembranen ein hohes Nucleinsäureimmobilisierungspotential aufweisen. Beide Arten von Membranen werden jedoch häufig in Blotting-Techniken verwendet.
Was ist eine Nitrozellulosemembran?
Nitrozellulosemembran ist ein häufig verwendeter Membranfilter in Nukleinsäure- und Protein-Blotting-Techniken. Es hat ein hohes Proteinbindungspotential. Daher werden Nitrozellulosemembranen in großem Umfang in der Western-Blotting-Technik verwendet. Nitrozellulosemembranen sind mit allen Hybridisierungstechniken kompatibel und zeigen überlegene Bindungskapazitäten ohne Interferenzen. Nitrozellulosemembranen sind von Natur aus hydrophil. Sie gehen eine hydrophile Wechselwirkung mit Molekülen ein und immobilisieren sie effizient auf der Membran. Kommerzielle Nitrozellulosemembranen sind in zwei Porengrößen erhältlich: 0,45 und 0,2 µm.
Abbildung 01: Beim Western Blotting verwendete Nitrozellulosemembran
Was ist eine Nylonmembran?
Nylonmembran ist eine andere Art von kommerzieller Membran, die in Blotting-Techniken verwendet wird. Es wird alternativ mit Nitrozellulosemembranen für Southern- und Northern-Blotting verwendet. Nylonmembranen sind aufgrund ihrer hohen Affinität zur Bindung an DNA idealer für Southern Blotting als Nitrocellulose. Aufgrund mehrerer einzigartiger Merkmale von Nylonmembranen verwenden Forscher üblicherweise Nylonmembranen für Southern- und Northern-Blotting anstelle von Nitrozellulosemembranen. Im Gegensatz zu Nitrozellulose werden Nylonmembranen auch zum Strippen und erneuten Sondieren empfohlen.
Abbildung 02: Für Southern Blotting verwendete Nylonmembran
Was ist der Unterschied zwischen Nitrozellulose- und Nylonmembran?
Nitrozellulose vs. Nylonmembran |
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| Nitrozellulosemembranen sind spröde. | Nylonmembranen sind weniger spröde. |
| Handhabung | |
| Sie sind schwierig zu handhaben. | Sie sind einfach zu handhaben. |
| Nachprüfen | |
| Nicht unterstützte Nitrozellulosemembranen sind schwer erneut zu untersuchen. | Resonding ist mit Nylonmembranen einfach. |
| Kompatibilität mit verschiedenen Lagerbedingungen | |
| Nitrozellulosemembranen haben eine geringere Festigkeit, um verschiedenen Lagerbedingungen standzuh alten. | Nylonmembranen reagieren robuster auf verschiedene Lagerbedingungen. |
| Verwenden | |
| Vorbenetzung ist erforderlich. | Bei Nylonmembranen ist keine Vorbefeuchtung erforderlich. |
| Hydrophile Natur | |
| Nitrozellulosemembranen sind von Natur aus hydrophil, aber weniger hydrophil als Nylonmembranen. | Sie sind von Natur aus stark hydrophil. |
| Immobilisierungspotential | |
| Nitrozellulosemembranen haben eine geringere Affinität zu Nukleinsäuren. Aber es hat eine hohe Affinität zu Proteinen. | Nylonmembranen haben ein höheres Bindungspotential mit Nukleinsäuren als Nitrozellulosemembranen. |
Zusammenfassung – Nitrozellulose vs. Nylonmembran
Nitrozellulose- und Nylonmembranen sind spezielle Folien, die in der Blotting-Technik verwendet werden, um das Bandenmuster auf dem Gel zu reproduzieren. Sie ermöglichen die Möglichkeit, eine bestimmte Sequenz oder ein Protein aus den Mischungen nachzuweisen, indem sie auf der Membran immobilisiert werden. Sobald die Moleküle auf der Membran immobilisiert sind, kann sie als Substrat für Hybridisierungsanalysen mit markierten Sonden verwendet werden. Nitrozellulosemembranen werden aufgrund ihrer hohen Bindungsaffinität zu Proteinen häufig für den Proteinnachweis in der Western-Blotting-Technik verwendet. Nylonmembranen werden häufig für das Southern- und Northern-Blotting verwendet. Dies ist der Unterschied zwischen Nitrozellulose- und Nylonmembran.
