Hauptunterschied – RNASE A vs. RNASE H
Die Ribonukleasen sind Nukleasen, die RNA spezifisch in kleinere Einheiten abbauen. Sie können in zwei Kategorien unterteilt werden; Endoribonucleasen und Exoribonucleasen. Endoribonuklease ist eine Endonuklease, die entweder einzelsträngige oder doppelsträngige RNA abbauen kann. Es sp altet die Phosphodiesterbindungen innerhalb einer RNA-Polynukleotidkette. Die Beispiele sind RNase A, RNase III, RNase T1, RNase P und RNase H. Exoribonuklease ist eine Exonuklease, die RNA abbaut, indem sie terminale Nukleotide entweder vom 5'-Ende oder vom 3'-Ende des RNA-Moleküls entfernt. Die Beispiele sind RNase R, RNase II, RNase D und RNase PH. Der Hauptunterschied zwischen RNASE A und RNASE H besteht darin, dass die RNase A eine Pankreas-Ribonuklease ist, die spezifisch einzelsträngige RNA in kleinere Komponenten abbaut, während RNase H ein unspezifisches Enzym ist, das die RNA in RNA-DNA-Hybriden über sp altet der hydrolytische Mechanismus.
Was ist RNASE A?
Die RNase A ist eine Pankreas-Ribonuklease, die spezifisch die ungepaarten Cytosin- und Uracil-Reste am 3'-Ende der einzelsträngigen RNA sp altet. RNase H arbeitet bei einer höheren Salzkonzentration (0,3 M oder höhere NaCl-Konzentration). Die hydrolytische Reaktion ist zweistufig. Es bildet ein 3'-phosphoryliertes Produkt über das zyklische 2', 3'-Monophosphat-Zwischenprodukt. Obwohl es bei höheren Salzkonzentrationen spezifisch für einzelsträngige RNA ist, kann es bei niedrigeren NaCl-Konzentrationen (weniger als 0,3 M NaCl) auch doppelsträngige RNA und RNA in RNA-DNA-Hybriden abbauen.
Bruce Merrifield hat dieses Enzym erstmals synthetisiert. RNase A ist ein sehr beliebtes Enzym in der molekularen Forschung. Rinderpankreas-RNase A ist ein Beispiel für RNase A. Und es ist eines der widerstandsfähigsten Enzyme, die im Labor verwendet werden. Dieses Enzym benötigt für seine Aktivität keinen Cofaktor. Es ist ein sehr thermostabiles Enzym. RNase A ist das erste Enzym und das dritte Protein, zu dem eine korrekte Aminosäuresequenz nachgewiesen wurde. Dieses Enzym ist mit 124 Aminosäuren und einer Molekülmasse von 12600da sehr klein. Und es hat vier Histidinreste (His 12 und His 119, die an der katalytischen Reaktion beteiligt sind).
Abbildung 01: Die RNase A
RNase A kann durch Kochen einer Rohprobe isoliert werden. Beim Kochen bauen alle anderen Enzyme die verbleibende RNase A ab. RNase A ist ein erstaunlich stabiles Enzym. Dieses Enzym hemmt mit Ribonuklease-Inhibitorprotein Schwermetall- und Uridinvanadat-Komplexe.
Was ist RNase H?
Die RNase H ist ein unspezifisches Ribonuklease-Enzym, das RNA in RNA-DNA-Hybriden über eine hydrolytische Reaktion abbauen kann. Die RNase H sp altet die 3’-O-P-Bindung der RNA in einem RNA-DNA-Hybrid. Letztendlich produziert es 3'OH- und 5'-Phosphat-terminierte Produkte. Bei der DNA-Replikation spielt es eine entscheidende Rolle, indem es den RNA-Primer entfernt, nachdem neue DNA-Stränge gebildet wurden. Unter Laborbedingungen baut es spezifisch RNA in RNA-DNA-Hybriden ab, nicht aber DNA und unhybridisierte RNA. Und dieses Enzym wird normalerweise verwendet, um die RNA-Matrize zu zerstören, nachdem der erste komplementäre DNA-Strang während der cDNA-Synthese gebildet wurde.
Abbildung 02: RNase H
RNase H wird auch in Nukleaseschutzassays verwendet. Es kann auch zur Entfernung des Poly-A-Schwanzes von mRNA eingebaut werden. RNase H hat die Fähigkeit, die nichtkodierende RNA innerhalb und außerhalb der Zelle zu zerstören. Für diese Proteinaktivität werden die Metallionen als Cofaktoren benötigt. Ein Chelatbildner (EDTA) kann verwendet werden, um das RNase-H-Enzym zu hemmen.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen RNASE A und RNASE H?
- Beide sind Proteine in der Natur.
- Beide sind Endoribonuclease
- Beide können RNA abbauen.
- Beide führen hydrolytische Reaktionen durch.
- Molekularlabore verwenden beides.
Was ist der Unterschied zwischen RNASE A und RNASE H?
RNASE A vs. RNASE H |
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| RNase A ist eine Pankreas-Ribonuklease, die bei höherer Salzkonzentration spezifisch das 3'-Ende von ungepaarten Cytosin- und Uracilresten einzelsträngiger RNA sp altet. | RNase H ist ein unspezifisches Ribonuklease-Enzym, das RNA in RNA-DNA-Hybriden über eine hydrolytische Reaktion abbauen kann. |
| Art der RNA-Sp altung | |
| RNase A sp altet spezifisch einzelsträngige RNA bei höherer Salzkonzentration. | RNase H sp altet RNA in RNA-DNA-Hybriden. |
| Bedarf an Co-Faktoren für Aktivität | |
| RNase A benötigt für seine Aktivität keine Cofaktoren. | RNase H benötigt Metallionen als Cofaktoren für ihre Aktivität. |
| Inhibitoren der Proteinaktivität | |
| Ribonuklease-Inhibitor-Protein, Schwermetall- und Uridin-Vanadat-Komplexe hemmen die RNAse A-Aktivität. | Ein Chelatbildner (EDTA) hemmt die RNase-H-Aktivität. |
| RNA-Primer-Entfernung bei der DNA-Replikation | |
| RNase A wird nicht zur Entfernung von RNA-Primern bei der DNA-Replikation verwendet. | RNase H wird zur Entfernung von RNA-Primern bei der DNA-Replikation verwendet |
| DNA-Template-Entfernung bei der Synthese komplementärer DNA (C-DNA) | |
| RNase A wird nicht zur Entfernung von RNA-Matrizen während der Synthese komplementärer DNA (C-DNA) verwendet. | RNase H wird zur Entfernung von RNA-Matrizen während der Synthese komplementärer DNA (C-DNA) verwendet. |
| Entfernung des Poly-A-Schwanzes in mRNA, die mit Oligo (dt) hybridisiert ist | |
| RNase A wird nicht verwendet, um den „Poly-A-Schwanz“in mit Oligo (dt) hybridisierter mRNA zu entfernen. | RNase H wird verwendet, um den „Poly-A-Schwanz“in mRNA zu entfernen, die mit Oligo (dt) hybridisiert ist |
Zusammenfassung – RNASE A vs. RNASE H
Die Ribonukleasen sind Nukleaseenzyme, die die Fähigkeit haben, RNA in kleinere Einheiten zu sp alten. Sie sind zwei Arten; Endoribonucleasen und Exoribonucleasen. Endoribonuklease ist eine Endonuklease, die die Fähigkeit hat, einzelsträngige oder doppelsträngige RNA abzubauen. Und es sp altet die Phosphodiesterbindung innerhalb einer RNA-Polynukleotidkette. RNase A und RNase H sind zwei Endoribonukleasen. RNase A ist eine Pankreas-Ribonuklease, die bei höherer Salzkonzentration spezifisch ungepaarte Cytosin- und Uracilreste am 3'-Ende der einzelsträngigen RNA sp altet. RNase H ist ein unspezifisches Ribonuklease-Enzym, das RNA in RNA-DNA-Hybriden über eine hydrolytische Reaktion abbauen kann. Dies ist der Unterschied zwischen RNase A und RNase H.
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