Transformation vs. Transfektion
Transformation und Transfektion sind zwei einfache Techniken, um ein fremdes Gen in eine Wirtszelle einzuführen. Diese Techniken hängen jedoch von der Art des Wirts- oder Vektorsystems ab.
Was ist Zelltransformation?
Transformation ist die Technik, die verwendet wird, um Gene in Hefe- und Bakterienzellen einzuführen. Diese Technik verursacht normalerweise vererbbare Veränderungen in Genen, und daher ist die Expression des Gens dauerhaft. Die bakterielle Transformation wurde erstmals 1928 von Frederick Griffith eingeführt. Dann, in den frühen 1970er Jahren, wurde diese Technik in E. Coli. Während des Transformationsprozesses von E. coli werden die Zellen in eisk alter Lösung von CaCl2 eingeweicht. Dieser Schritt macht E.coli-Zellen kompetent. Danach werden die kompetenten Zellen mit der Plasmid-DNA vermischt und für 20-30 min auf Eis inkubiert. Anschließend erfolgt ein kurzer Hitzeschock, um den Transfer von DNA in die Zelle zu ermöglichen. Abschließend werden die Zellen in eine Nährlösung gegeben und 60–90 min bei 37 °C inkubiert, um die Plasmide zu etablieren. Sobald diese Schritte erfolgreich abgeschlossen sind, können die transformierten Zellen auf ein geeignetes Medium zur Zellvermehrung gegeben werden. Da die Transformation als ineffiziente Technik gilt, darf sie nicht zur Herstellung von Klonbanken verwendet werden.
Was ist Zelltransfektion?
Transfektion ist eine Methode zur Einführung eines fremden Gens, normalerweise in Säugetierzellen. Es gibt zwei Transfektionsmethoden; nämlich transiente Transfektion und stabile Transfektion. Bei der transienten Transfektion ist die Genexpression für eine begrenzte Zeit verfügbar; somit verursacht die Veränderung des Gens eine vorübergehende Expression. Diese Transfektionsmethode ist einfach und schnell; daher kann es routinemäßig verwendet werden. Ein Nachteil der transienten Transfektion ist die Schwierigkeit, Proteinsynthesesysteme im großen Maßstab anzuwenden.
Bei der stabilen Transfektion wird ein Zielgen in das Genom der Wirtszelle integriert und somit ist die Genexpression im Gegensatz zur transienten Transfektion dauerhaft.
Was ist der Unterschied zwischen Transformation und Transfektion?
• Transformation ist die Einführung eines Gens in eine prokaryotische Zelle (Bakterium und Hefe), während Transfektion üblicherweise als Einführung eines Gens in eine Säugetierzelle bezeichnet wird.
• Transformation führt zu vererbbaren Veränderungen in Genen, während Transfektion entweder zu vorübergehender Expression oder dauerhaften Veränderungen in Genen führen kann.
