Der Hauptunterschied zwischen FPLC und HPLC besteht darin, dass FPLC eine Art Flüssigkeitschromatographie ist, die große Biomoleküle wie Proteine, Nukleotide und Peptide reinigt, während HPLC eine Art Flüssigkeitschromatographie ist, die Verbindungen mit kleinem Molekulargewicht trennt.
Flüssigchromatographie ist eine Technik, mit der eine Probe in ihre einzelnen Bestandteile getrennt wird. Diese Trennung erfolgt aufgrund der Wechselwirkung spezifischer Proben mit mobilen und stationären Phasen. Komponenten innerhalb einer Probe werden basierend auf der Affinität jeder Komponente zur mobilen Phase in der Flüssigchromatographie getrennt. Wenn die mobile Phase und die Probe eine Säule passieren, beginnen sich die Komponenten der Probe in Banden zu trennen, die durch UV-VIS-Spektroskopie nachgewiesen werden können. Daher sind FPLC und HPLC zwei Arten von Flüssigchromatographietechniken.
Was ist FPLC?
FPLC ist eine Art Flüssigchromatographie, die große Biomoleküle wie Proteine, Nukleotide und Peptide reinigt. Die schnelle Proteinflüssigkeitschromatographie (FPLC) wurde erstmals 1982 in Schweden von der Firma Pharmacia entwickelt und vermarktet. Sie wird häufig zur Analyse oder Reinigung von Proteinmischungen verwendet. Dies erfolgt nach dem Prinzip der Affinität der Probenbestandteile zu einer bewegten Flüssigkeit (mobile Phase) und einem porösen Feststoff (stationäre Phase). Bei der FPLC ist die mobile Phase ein Puffer und die stationäre Phase ein aus Kügelchen bestehendes Harz. Es besteht normalerweise aus vernetzter Agarose, die in eine zylindrische Glas- oder Kunststoffsäule gepackt ist.
Abbildung 01: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) Apparatur
In den meisten FLPC-Strategien wird Ionenaustauscherharz verwendet. Daher wird das interessierende Protein durch eine Ladungswechselwirkung an das Harz binden. Die FLPC-Technik verwendet auch zwei Puffer: Puffer 1 (der Laufpuffer) und Puffer 2 (der Elutionspuffer). Wenn Puffer und Probenmischung durch die Säule laufen, bindet das interessierende Protein in der Mischung zunächst durch eine Ladungswechselwirkung an das Harz. Das interessierende Protein wird jedoch dissoziiert und kehrt in die Lösung im Elutionspuffer zurück, wenn der Elutionspuffer am Ende des Prozesses durch die Säule läuft. Später passiert die Lösung (Elutionsmittel, das interessierendes Protein enthält) zwei Detektoren, die die Salzkonzentration und die Proteinkonzentration messen. Wenn jedes Protein eluiert wird, erscheint es während der Detektion als „Peak“und kann zur weiteren Verwendung gesammelt werden.
Was ist HPLC?
HPLC ist eine Art Flüssigkeitschromatographie, die Verbindungen mit kleinem Molekulargewicht trennt. 1969 wurde die erste HPLC kommerziell von der Waters Corporation, USA, hergestellt. Bei der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) wird ein Probengemisch (Analyt) in einem Lösungsmittel (mobile Phase) unter hohem Druck durch eine Säule mit chromatographischem Füllmaterial (stationäre Phase) gepumpt. Das Probengemisch wird von einem sich bewegenden Trägergasstrom aus Helium oder Stickstoff getragen.
Abbildung 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
Die Komponenten in der Probenmischung, die die geringste Wechselwirkung mit der stationären Phase oder die größte Wechselwirkung mit der mobilen Phase aufweisen, verlassen die Säule schneller. Andererseits werden die Komponenten in der Probenmischung, die die stärkste Wechselwirkung mit der stationären Phase oder die geringste Wechselwirkung mit der mobilen Phase haben, die Säule langsamer verlassen. Basierend auf dem obigen Wechselwirkungsprinzip können die Komponenten des Probengemisches getrennt werden. Darüber hinaus identifiziert der Instrumentendetektor jede Komponente der Probenmischung, die die Säule verlässt. HPLC wird verwendet, um Umwelt- und biologische Proben auf das Vorhandensein oder Fehlen bekannter Verbindungen wie Medikamente, Toxine oder Pestizide zu untersuchen. Es wird in verschiedenen Branchen wie Pharmazie, Umwelt, Forensik und Chemie eingesetzt.
Was sind die Gemeinsamkeiten zwischen FPLC und HPLC?
- FPLC und HPLC sind Arten der Flüssigkeitschromatographie.
- Beide werden verwendet, um biologische Proben zu trennen und zu identifizieren.
- Sie haben eine flüssige mobile Phase und eine feste stationäre Phase.
- Beide Techniken verwenden eine Säule, um die Probe zu passieren.
- Diese Techniken verwenden Pumpen, Detektoren, Ventile und Software zur Probentrennung und -detektion.
Was ist der Unterschied zwischen FPLC und HPLC?
FPLC ist eine Art Flüssigchromatographie, die zur Reinigung großer Biomoleküle wie Proteine, Nukleotide und Peptide verwendet wird. HPLC ist eine Art Flüssigkeitschromatographie, die verwendet wird, um Verbindungen mit kleinem Molekulargewicht zu trennen. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen FPLC und HPLC. Darüber hinaus verwendet FPLC pH- und Leitfähigkeitsmonitore sowie Fraktionssammler. Im Gegensatz dazu verwendet HPLC keine pH- und Leitfähigkeitsmonitore und Fraktionssammler.
Die folgende Infografik listet weitere Unterschiede zwischen FPLC und HPLC in tabellarischer Form auf.
Zusammenfassung – FPLC vs. HPLC
Chromatographie ist eine Laboranalysetechnik, die zur Trennung von Komponenten aus einem Gemisch verwendet wird. Es ist in verschiedene Arten unterteilt, wie z. B. Säulenchromatographie, Gaschromatographie, Flüssigkeitschromatographie, Ionenaustauschchromatographie usw. FPLC und HPLC sind zwei Arten von Flüssigkeitschromatographietechniken. FPLC ist eine Art Flüssigkeitschromatographie, die zur Reinigung großer Biomoleküle wie Proteine, Nukleotide und Peptide verwendet wird. Andererseits ist HPLC eine Art Flüssigkeitschromatographie, die verwendet wird, um Verbindungen mit kleinem Molekulargewicht zu trennen. Daher ist dies die Zusammenfassung dessen, was der Unterschied zwischen FPLC und HPLC ist.
