Hauptunterschied – direkter vs. indirekter ELISA
Ein enzymgekoppelter Immunoassay (ELISA), auch bekannt als Enzymimmunoassay, ist ein serologischer Test, der Antikörper im Blut nachweist. Es wird als diagnostisches Instrument verwendet, um herauszufinden, ob der Patient einem bestimmten Virustyp oder einem anderen Infektionserreger (Antigen) ausgesetzt war und ob der Körper Antikörper gegen die Infektion gebildet hat. ELISA kann auch vergangene und aktuelle Infektionen identifizieren. Daher wird ELISA von den Ärzten häufig als Vorauswahltest vor einer eingehenden Analyse von Krankheiten verwendet. Dieser Test kann im Labor durchgeführt werden, indem dem Patienten eine Blutprobe entnommen wird. Es gibt zwei Arten von ELISA-Tests: direkter ELISA und indirekter ELISA. Der Hauptunterschied zwischen direktem und indirektem ELISA besteht darin, dass der indirekte ELISA empfindlicher ist und die Zugabe eines sekundären Antikörpers erfordert, während der direkte ELISA weniger empfindlich ist und nur einen primären Antikörper verwendet.
Was ist ein direkter ELISA?
ELISA ist ein krankheitsdiagnostischer Test, der durchgeführt wird, um das Vorhandensein bestimmter Antigene oder Antikörper im Blut nachzuweisen. Es wird als Plattenassay durchgeführt. Es verwendet Antikörper, die mit leicht zu bestimmenden Enzymen verbunden sind. Das Vorhandensein von Antigenen in der Serumprobe bindet an spezifische Antikörper, die mit Enzymen verbunden sind. Im letzten Schritt wird ein spezifisches Substrat hinzugefügt, um mit dem Enzym zu reagieren. Das Enzym wandelt das Substrat in ein farbiges oder signalerzeugendes Produkt um. Die Farbänderung im chemischen Substrat zeigt das Vorhandensein eines bestimmten Antikörpers in der Serumprobe an. Der direkte ELISA-Test verwendet nur einen primären Antikörper, der mit dem Enzym verbunden ist. Nach der Bindung an das Antigen ändert es schnell die Farbe, was auf das Vorhandensein des Infektionserregers im Blut hinweist. Allerdings ist die Intensität der Signale im direkten ELISA schwächer, da die Epitope auf die Bindung der Antigene beschränkt sind. Daher ist der direkte ELISA im Vergleich zum indirekten ELISA weniger empfindlich.
Abbildung 01: Direkter ELISA-Test
Was ist ein indirekter ELISA?
ELISA kann mit zwei Arten von Antikörpern durchgeführt werden, nämlich; primärer Antikörper und sekundärer Antikörper. Das indirekte ELISA-Tool verwendet beide Arten von Antikörpern, um die Signale für einen besseren Nachweis zu verstärken. Die indirekte ELISA-Technik wird wie folgt durchgeführt.
- Platten werden mit Antigenen inkubiert und gewaschen, um unspezifische Bindungen zu blockieren.
- Dann werden primäre Antikörper hinzugefügt und gewaschen.
- Enzymgebundene Sekundärantikörper werden zugegeben und gewaschen.
- Ein Substrat wird hinzugefügt und mit Enzymen reagieren gelassen.
- Signale werden erkannt und das Vorhandensein oder Fehlen des spezifischen Antigens in der Probe wird identifiziert.
Im indirekten ELISA-Test können mehrere Sekundärantikörper an einen einzigen Primärantikörper binden. Sekundärantikörper sind mit leicht nachweisbaren Enzymen verknüpft. Daher kann eine Bindung aufgrund von mehr als einer Wechselwirkung ein starkes Signal abgeben. Daher ist der indirekte ELISA empfindlicher als der direkte ELISA. Der indirekte ELISA kann jedoch aufgrund von Kreuzreaktionen der sekundären Antikörper unspezifische Signale erzeugen.
Abbildung 02: Indirekter ELISA-Test
Was ist der Unterschied zwischen direktem und indirektem ELISA?
Direkter vs. indirekter ELISA |
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| Der direkte ELISA ist weniger empfindlich als der indirekte ELISA. | Der indirekte ELISA ist empfindlicher. |
| Zeitaufwand | |
| Der direkte ELISA-Test ist ein schneller Prozess. | Der indirekte ELISA ist zeitaufwändig. |
| Verwendung von Antikörpern | |
| Im direkten ELISA wird nur eine Art von Antikörpern (primäre Antikörper) verwendet. | Primäre und sekundäre Antikörper werden für den indirekten ELISA verwendet. |
| Verbindung mit Enzymen | |
| Primäre Antikörper sind mit Enzymen verbunden. | Sekundäre Antikörper sind mit Enzymen verbunden. |
| Kreuzreaktivität von Zweitantikörpern | |
| Direkter ELISA eliminiert die Kreuzreaktivität von Zweitantikörpern. | Indirekter ELISA ist von Kreuzreaktivität von Zweitantikörpern betroffen. |
| Signale | |
| Signale sind im Vergleich zum indirekten ELISA schwach. | Signale werden im indirekten ELISA verstärkt. Daher ist es leicht zu erkennen. |
Zusammenfassung – direkter vs. indirekter ELISA
ELISA ist eine biochemische Technik, die hauptsächlich in der Immunologie verwendet wird, um das Vorhandensein eines Antikörpers oder eines Antigens in einer Blutprobe eines Patienten nachzuweisen. Es kann über zwei Verfahren durchgeführt werden, die als direkter oder indirekter ELISA bekannt sind. Der direkte ELISA-Test verwendet nur primäre Antikörper zum Nachweis des Antigens, während der indirekte ELISA sowohl primäre als auch sekundäre Antikörper verwendet. Beim direkten ELISA werden primäre Antikörper markiert, während beim indirekten ELISA sekundäre Antikörper markiert werden. Dies ist der Unterschied zwischen direktem und indirektem ELISA.
