Hauptunterschied – Durchflusszytometrie vs. FACS
Im Kontext der Zelltheorie sind Zellen die grundlegende strukturelle und funktionelle Einheit aller lebenden Organismen. Die Zellsortierung ist eine Methode, die verwendet wird, um verschiedene Zellen gemäß den physiologischen und morphologischen Merkmalen zu trennen. Sie können intrazelluläre oder extrazelluläre Eigenschaften haben. Die Interaktion von DNA, RNA und Proteinen wird als intrazelluläre interaktive Eigenschaften angesehen, während die Form, Größe und verschiedene Oberflächenproteine als extrazelluläre Eigenschaften betrachtet werden. In der modernen Wissenschaft haben Methoden der Zellsortierung dazu geführt, die verschiedenen Untersuchungen in biologischen Studien und auch die Etablierung neuer Prinzipien durch medizinische Forschung zu unterstützen. Die Zellsortierung wird mit verschiedenen Methoden durchgeführt, die sowohl primitive Methoden mit weniger Ausrüstung als auch fortschrittliche technologische Methoden mit der Verwendung hoch entwickelter Maschinen umfassen. Durchflusszytometrie, fluoreszenzaktivierte Zellsortierung (FACS), magnetische Zellselektion und Einzelzellsortierung sind die wichtigsten verwendeten Methoden. Durchflusszytometrie und FACS werden entwickelt, um Zellen nach ihren optischen Eigenschaften zu differenzieren. FACS ist eine spezialisierte Art der Durchflusszytometrie. Durchflusszytometrie ist eine Methode, die während der Analyse einer heterogenen Zellpopulation nach unterschiedlichen Zelloberflächenmolekülen, -größen und -volumina verwendet wird, was die Untersuchung einzelner Zellen ermöglicht. FACS ist ein Verfahren, bei dem ein Probengemisch von Zellen nach ihren Lichtstreuungs- und Fluoreszenzeigenschaften in zwei oder mehr Behälter sortiert wird. Dies ist der Hauptunterschied zwischen Durchflusszytometrie und FACS.
Was ist Durchflusszytometrie?
Durchflusszytometrie ist eine Methode, die zur Untersuchung und Bestimmung der Expression von intrazellulären Molekülen und der Zelloberfläche sowie zur Definition und Charakterisierung unterschiedlicher Zelltypen eingesetzt wird. Es wird auch zur Bestimmung des Zellvolumens und der Zellgröße und zur Bewertung der Reinheit von isolierten Subpopulationen verwendet. Dies ermöglicht die gleichzeitige Multiparameter-Auswertung einzelner Zellen. Durchflusszytometrie wird zur Messung der Fluoreszenzintensität verwendet, die durch fluoreszenzmarkierte Antikörper erzeugt wird, die helfen, Proteine oder Liganden zu identifizieren, die an assoziierte Zellen binden.
Abbildung 01: Durchflusszytometrie
Im Allgemeinen umfasst die Durchflusszytometrie hauptsächlich drei Untersysteme. Sie sind die Fluidik, die Elektronik und die Optik. In der Durchflusszytometrie stehen fünf Hauptkomponenten zur Verfügung, die bei der Zellsortierung verwendet werden. Sie sind eine Durchflusszelle (ein Flüssigkeitsstrom, der verwendet wird, um sie zu transportieren und die Zellen für den optischen Sensorprozess auszurichten), ein Messsystem (kann aus verschiedenen Systemen bestehen, einschließlich Quecksilber- und Xenonlampen, wassergekühlte Hochleistungs- oder luftgekühlte Laser mit niedriger Leistung oder Diodenlaser), ein ADC; Analog-Digital-Wandlersystem, Verstärkersystem und ein Computer zur Analyse. Die Erfassung ist der Prozess, bei dem die Daten von den Proben mit einem Durchflusszytometer gesammelt werden. Dieser Prozess wird durch einen Computer vermittelt, der mit dem Durchflusszytometer verbunden ist. Die im Computer vorhandene Software analysiert die vom Durchflusszytometer in den Computer eingespeisten Informationen. Die Software kann auch Parameter des Experiments anpassen, das das Durchflusszytometer steuert.
Was ist FACS?
Im Zusammenhang mit der Durchflusszytometrie ist die fluoreszenzaktivierte Zellsortierung (FACS) eine Methode, die zur Differenzierung und Sortierung einer Probe aus einem Gemisch biologischer Zellen verwendet wird. Die Zellen werden von zwei oder mehr Behältern getrennt. Das Sortierverfahren basiert auf den physikalischen Merkmalen der Zelle, zu denen Lichtstreuungs- und Fluoreszenzeigenschaften der Zelle gehören. Dies ist eine wichtige wissenschaftliche Technik, die verwendet werden kann, um zuverlässige quantitative und qualitative Ergebnisse von Fluoreszenzsignalen zu erh alten, die von jeder Zelle emittiert werden. Während FACS wird zunächst die zuvor erh altene Mischung von Zellen; Eine Suspension wird in die Mitte eines schmalen Flüssigkeitsstrahls geleitet, der schnell fließt. Der Flüssigkeitsstrom ist so ausgelegt, dass die Zellen in der Suspension basierend auf dem Durchmesser jeder Zelle getrennt werden. Auf den Suspensionsstrom wird ein Vibrationsmechanismus angewendet, der zur Bildung einzelner Tröpfchen führt.
Abbildung 02: FACS
Das System ist kalibriert, um einen einzelnen Tropfen mit einer Zelle zu erzeugen. Unmittelbar vor der Tröpfchenbildung bewegt sich die Fließsuspension entlang einer Fluoreszenzmessvorrichtung, die die Fluoreszenzcharakteristik jeder Zelle erfasst. An der Stelle der Tröpfchenbildung wird ein elektrischer Aufladering platziert, in dem vor der Messung der Fluoreszenzintensität eine Ladung in den Ring induziert wird. Sobald die Tröpfchen aus dem Suspensionsstrom gebildet sind, wird eine Ladung in den Tröpfchen eingefangen, die dann in ein elektrostatisches Ablenksystem eintritt. Je nach Charge leitet das System die Tröpfchen in verschiedene Behälter um. Das Verfahren zum Aufbringen der Ladung variiert gemäß den verschiedenen Systemen, die beim FACS verwendet werden. Die beim FACS verwendete Ausrüstung ist als fluoreszenzaktivierter Zellsortierer bekannt.
Was ist die Ähnlichkeit zwischen Durchflusszytometrie und FACS?
Durchflusszytometrie und FACS werden entwickelt, um Zellen anhand ihrer optischen Eigenschaften zu differenzieren
Was ist der Unterschied zwischen Durchflusszytometrie und FACS?
Durchflusszytometrie vs. FACS |
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| Durchflusszytometrie ist eine Methode, die bei der Analyse einer heterogenen Zellpopulation nach unterschiedlichen Zelloberflächenmolekülen, -größen und -volumina eingesetzt wird und die Untersuchung einzelner Zellen ermöglicht. | FACS ist ein Verfahren, bei dem eine Probenmischung von Zellen nach ihren Lichtstreuungs- und Fluoreszenzeigenschaften in zwei oder mehr Behälter sortiert wird. |
Zusammenfassung – Durchflusszytometrie vs. FACS
Die Zelle ist die strukturelle und funktionelle Grundeinheit aller lebenden Organismen. Zellsortierung ist der Prozess, bei dem Zellen basierend auf ihren intrazellulären und extrazellulären Eigenschaften isoliert und in verschiedene Kategorien differenziert werden. Durchflusszytometrie und FACS sind zwei wichtige Methoden bei der Zellsortierung. Beide Verfahren werden entwickelt, um Zellen nach ihren optischen Eigenschaften zu differenzieren. Durchflusszytometrie ist eine Methode, die während der Analyse einer heterogenen Zellpopulation nach unterschiedlichen Zelloberflächenmolekülen, -größen und -volumina verwendet wird, was die Untersuchung einzelner Zellen ermöglicht. FACS ist ein Verfahren, bei dem ein Probengemisch von Zellen nach ihren Lichtstreuungs- und Fluoreszenzeigenschaften in zwei oder mehr Behälter sortiert wird. Dies ist der Unterschied zwischen Durchflusszytometrie und FACS.
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