Hauptunterschied – SDS-Seite vs. Western Blot
Western Blotting ist eine Technik, die ein spezifisches Protein aus einer Proteinprobe nachweist. Diese Technik wird über mehrere Schlüsselschritte durchgeführt: Gelelektrophorese, Blotting und Hybridisierung. Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS Page) ist eine Art Gelelektrophoresetechnik, die verwendet wird, um Proteine nach ihrer Größe (Molekulargewicht) zu trennen. Western Blot ist ein spezielles Blatt einer Blotting-Membran, das verwendet wird, um dasselbe Muster der Proteine auf der SDS-Seite zu übertragen. Der Hauptunterschied zwischen SDS Page und Western Blot besteht darin, dass SDS Page die Trennung von Proteinen in einer Mischung ermöglicht, während Western Blot den Nachweis und die Quantifizierung eines bestimmten Proteins aus einer Mischung ermöglicht. Beide sind in Studien zur Proteinanalyse nützlich.
Was ist eine SDB-Seite?
SDS Page ist eine Gelelektrophoresetechnik, die zur Proteintrennung verwendet wird. Es wird häufig in der Biochemie, Genetik, Forensik und Molekularbiologie verwendet. Nachdem die Proteine aus der Probe extrahiert wurden, laufen sie auf einem Gel aus SDS und Polyacrylamid. SDS ist ein anionisches Detergens, das verwendet wird, um Proteine zu linearisieren (Proteine zu denaturieren) und linearisierten Proteinen proportional zu ihrer Molekülmasse eine negative Ladung zu verleihen. Polyacrylamid wird der feste Träger für das Gel. Denaturierte Proteine, die negativ geladen sind, wandern durch das Gel zum positiven Ende des Apparats. Je nach Größe der Proteine unterscheiden sich die Migrationsgeschwindigkeiten zwischen den Proteinen und es kommt zu einer Trennung. Daher ist die SDS-Seite nützlich für die Trennung einzelner Proteine basierend auf ihrer Größe.
Die Vorbereitung des Polyacrylamidgels für die Fraktionierung von Proteinen ist ein entscheidender Schritt in SDS Page. Die richtige Konzentration von Polyacrylamid und die Art des verwendeten Vernetzungsmittels beeinflussen stark die physikalischen Eigenschaften des Gels, was die eigentliche Trennung der verschiedenen Proteine ausmacht. Die Porengrößen des Gels sollten für eine effektive Trennung richtig gehandhabt werden. SDS Page wird jedoch als hochauflösende Proteintrenntechnik angesehen.
Die SDS-Page-Technik hat eine große Einschränkung bei der Proteinanalyse. Da SDS Proteine vor der Trennung denaturiert, erlaubt es nicht den Nachweis von enzymatischer Aktivität, Proteinbindungswechselwirkungen, Protein-Cofaktoren usw.
Abbildung 01: SDB-Seite
Was ist Western Blot?
Western-Blotting-Technik ermöglicht den Nachweis eines spezifischen Proteins aus einem Proteingemisch und die Messung der Menge und des Molekulargewichts des Proteins. Western Blot ist die Membran, die während des Blotting-Verfahrens verwendet wird, um das Spiegelbild der Proteinmuster im SDS-Polyacrylamidgel zu erh alten. Die beim Western Blot verwendete Membran besteht meist aus Nitrocellulose oder Polyvinylidendifluorid (PVDF). Die Membran mit dem übertragenen Protein kann verwendet werden, um das gewünschte Protein zu identifizieren. Es erfordert hochwertige Antikörper zum Nachweis des gewünschten Proteins durch Hybridisierung. Der Antikörper bindet an sein spezifisches Antigen und zeigt das Vorhandensein des gewünschten Antigens an, bei dem es sich um ein Protein handelt.
Die Übertragung der Proteine vom SDS-Polyacrylamidgel auf den Western Blot erfolgt durch Elektroblot. Es ist eine effektive und schnelle Methode, bei der die Proteine durch Elektrophorese aus dem Gel heraus und auf die Nitrozellulosemembran (Western Blot) gelangen.
Abbildung 02: Western Blot
Was ist der Unterschied zwischen SDS-Seite und Western Blot?
SDS-Seite vs. Western Blot |
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| SDS Page ist eine Gelelektrophorese-Technik. | Western Blot ist eine Technik, die auf einer Membran durchgeführt wird, um ein spezifisches Protein aus einer Mischung nachzuweisen. |
| Verwenden | |
| SDS-Seite ermöglicht die Trennung von Proteinen nach ihrer Größe. | Western Blot ermöglicht die Übertragung von Proteinen auf das SDS-Seitengel, ohne dessen Muster zu verändern, und ermöglicht die Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern. |
| Nachteile | |
| Proteindenaturierung, hohe Kosten und das Vorhandensein von Neurotoxin-Chemikalien sind die Nachteile dieser Technik. | Diese Technik ist zeitaufwändig und erfordert eine erfahrene Person und spezifische kontrollierte Bedingungen. |
Zusammenfassung – SDS-Seite vs. Western Blot
SDS-Seite und Western Blot sind zwei Methoden der Proteinanalyse. SDS Page ermöglicht die einfache Trennung von Proteinen auf einem Gel nach ihrem Molekulargewicht. Western Blot hilft, das Vorhandensein und die Menge eines bestimmten Proteins durch Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern zu bestätigen. Dies ist der Unterschied zwischen SDS-Seite und Western Blot.
