Der Hauptunterschied zwischen dem Bradford- und dem Lowry-Proteinassay besteht darin, dass der Bradford-Proteinassay auf der Absorptionsverschiebung des Farbstoffs Coomassie Brilliant Blue G-250 basiert, während der Lowry-Proteinassay auf der Reaktion von Kupferionen (Cu+)-Ionen basiert hergestellt durch Oxidation von Peptidbindungen mit Folin-Cioc alteu-Reagenz.
Ein Assay ist eine Analysetechnik, die dabei hilft, die wichtigsten funktionellen Komponenten einer Probe zu charakterisieren. Daher könnte ein Assay entweder ein qualitativer oder ein quantitativer Test sein. Viele Bereiche einschließlich Labormedizin, Pharmakologie, Umweltbiologie, Molekularbiologie, Biochemie und Immunologie verwenden diese Art von Assays routinemäßig. Bradford- und Lowry-Proteinassay sind zwei biochemische Assays, die die Proteinkonzentration in einer Probenlösung bestimmen. Beide Assays verwenden kolorimetrische Techniken, um Ergebnisse zu liefern.
Was ist der Bradford-Protein-Assay?
Bradford Protein Assay ist ein schnelles spektroskopisches Analyseverfahren zur Proteinanalyse. Es zeigt eine hohe Genauigkeit bei der Messung der Proteinkonzentration in einer Lösung. Marion Bradford führte dieses Verfahren 1976 ein. Bei diesem Assay basiert die Gesamtreaktion auf der Aminosäurezusammensetzung der gemessenen Proteine. Mit anderen Worten ist der Bradford-Proteinassay ein kolorimetrischer Assay. Es verwendet den Farbstoff Coomassie Brilliant Blue. Daher hängt dieser kolorimetrische Proteinassay von der Extinktionsverschiebung des Farbstoffs ab. Coomassie Brilliant Blue G-250 existiert in drei Formaten: kationisch (rot), anionisch (blau) und neutral (grün). Unter sauren Bedingungen wird die rote Form des Farbstoffs in Blau umgewandelt. Es bestätigt die Bindung des Proteins. Wenn das Protein nicht vorhanden ist, kann die Lösung braun bleiben.
Abbildung 01: Bradford-Protein-Assay
Bradford-Proteinassay unterscheidet sich von anderen Proteinassays, da es weniger anfällig für Störungen durch verschiedene chemische Verbindungen ist, die in der Proteinlösung vorhanden sind. Zu diesen Verbindungen gehören Natrium, Kalium, Glucose und Saccharose usw.
Was ist ein Lowry-Protein-Assay?
Lowry-Proteinassay ist ein biochemischer Assay zur Bestimmung des Gesamtproteingeh alts in einer Lösung. Oliver H. Lowry hat dieses Reagenz 1940 entwickelt. Das Verfahren zeigt die Gesamtproteinkonzentration der Lösung durch einen Farbumschlag an, der proportional zur Proteinkonzentration in der Lösung ist. Daher ist dies auch ein kolorimetrischer Proteinassay.
Die Grundlage dieses Verfahrens ist die Reaktion zwischen Kupferionen (Cu+), die durch die Oxidation von Peptidbindungen entstehen, und dem Folin-Cioc alteu-Reagenz. Außerdem enthält dieses Reagenz Phosphormolybdänsäure und Phosphorwolframsäure. Der Reaktionsmechanismus des Lowry-Proteinassays ist jedoch nicht gut verstanden. Aber es beinh altet die Oxidation von Cystein-, Tryptophan- und Tyrosinresten durch die Reduktion des Folin-Cioc alteu-Reagenz.
Abbildung 02: Lowry-Protein-Assay
Die Cysteinreste tragen zur im Lowry-Proteinassay beobachteten Extinktion bei, und die Reaktion führt zu einem leuchtend blauen Molekül; Heteropoly Molybdänblau. Die Reduktion dieses Moleküls wird durch Extinktion bei 660 nm gemessen. Daher leitet die Konzentration von Cystein- und Tryptophanresten, die das Folin-Cioc alteu-Reagenz reduzierten, die Gesamtkonzentration des Proteins in der Lösung ab.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen dem Bradford- und dem Lowry-Protein-Assay?
- Bradford- und Lowry-Proteinassays bestimmen die Proteinkonzentration in einer Lösung.
- Beide Methoden sind farbmetrische Methoden.
- Außerdem ist die Empfindlichkeit beider Methoden hoch.
Was ist der Unterschied zwischen dem Bradford- und dem Lowry-Protein-Assay?
Bradford- und Lowry-Proteinassay sind zwei Arten von Assays, die die Proteinkonzentration in einer Lösung bestimmen. Der Bradford-Proteinassay beruht auf der Extinktionsverschiebung des Farbstoffs Coomassie Brilliant Blue G-250, während der Lowry-Proteinassay auf der Reaktion von Kupferionen, die durch die Oxidation von Peptidbindungen erzeugt werden, mit dem Folin-Cioc alteu-Reagenz beruht. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen dem Bradford- und dem Lowry-Proteinassay. Der Bradford-Proteinassay benötigt 15 Minuten, um ein Ergebnis zu liefern, während der Lowery-Proteinassay 40-60 Minuten benötigt, um ein Ergebnis zu liefern. Somit ist dies ein weiterer Unterschied zwischen dem Bradford- und dem Lowry-Proteinassay. Darüber hinaus ist der Bradford-Proteinassay von der Aminosäurezusammensetzung abhängig, während der Lowry-Proteinassay teilweise von der Aminosäurezusammensetzung abhängig ist. Daher ist dies auch ein Unterschied zwischen dem Bradford- und dem Lowry-Proteinassay.
Die folgende Infografik enthält weitere Einzelheiten zum Unterschied zwischen dem Bradford- und dem Lowry-Proteinassay.
Zusammenfassung – Bradford vs. Lowry Protein Assay
Ein Assay ist eine Analysetechnik zur Charakterisierung der funktionellen Hauptkomponente einer Probe. Bradford- und Lowry-Proteinassay sind zwei Arten von Proteinassays, die mit kolorimetrischen Techniken funktionieren. Sowohl Bradford- als auch Lowry-Proteinassays bestimmen die Proteinkonzentration in einer Lösung. Der Hauptunterschied zwischen Bradford und Lowry Protein Assay liegt jedoch in der kolorimetrischen Technik, die sie verwenden. Der Bradford-Proteinassay verwendet das Coomassie-Brillantblau G-250, während der Lowry-Proteinassay Kupferionen (Cu+)-Ionen und Folin-Cioc alteu-Reagenz verwendet. Darüber hinaus liefert die Bradford-Methode schnellere Ergebnisse als der Lowry-Proteinassay. Beide Methoden sind jedoch hochempfindliche Methoden und unterliegen Störungen durch verschiedene Substanzen.
