Der Hauptunterschied zwischen kompetitivem und nicht-kompetitivem ELISA besteht darin, dass kompetitiver ELISA ein Hemmantigen verwendet, während nicht-kompetitiver ELISA kein Hemmantigen für den Assay verwendet.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ist ein immunologischer Assay, der verschiedene Ziele wie Antikörper, Antigene, Proteine und Glykoproteine nachweist. Es ist eine schnelle und einfache Methode zur Durchführung. Daher wird es häufiger für Forschungs- und Diagnosezwecke verwendet. ELISA beinh altet die Verwendung von Enzymen und die spezifische Bindung von Antikörper und Antigen. Basierend darauf, wie die Reaktionen auftreten, gibt es vier Arten von ELISA: direkter ELISA, indirekter ELISA, Sandwich-ELISA und Hemmungs-ELISA. Direkter, indirekter und Sandwich-ELISA sind Arten von nicht kompetitivem ELISA, während der Hemmungs-ELISA ein Typ von vollständigem ELISA ist. Das Hauptziel dieses Artikels ist es, den Unterschied zwischen kompetitivem und nicht-kompetitivem ELISA zu diskutieren.
Was ist ein kompetitiver ELISA?
Competitive ELISA misst die Antigenkonzentration in einer Probe durch den Nachweis von Signalinterferenzen. Hier verwendet der Assay ein Inhibitor-Antigen. Es handelt sich also um eine Art Hemmungs-ELISA. Während dieses Verfahrens konkurrieren die in der Probe vorhandenen Antigene mit dem ausgewählten Referenzantigen um die Bindung an eine bestimmte Menge an markiertem Antikörper. Außerdem beginnt dieses Verfahren mit der Inkubation der Probe mit der überschüssigen Menge an markiertem Antikörper. Außerdem sollte das Referenzantigen auf einer Testplatte mit mehreren Vertiefungen vorbeschichtet werden. Dann sollte die Probenmischung auf die Testplatte gegeben werden, die das Referenzantigen enthält. Abhängig von der Antigenmenge in der Probe binden freie Antikörper an das Referenzantigen. Wenn also mehr Probenantigen vorhanden ist, wird weniger Referenzantigen nachgewiesen. Dadurch entsteht ein schwächeres Signal.
Abbildung 01: ELISA
Im Gegensatz dazu, wenn die Probe weniger Antigen enthält, wird immer mehr Referenzantigen die Antikörper besetzen und ein starkes Signal geben. Da der kompetitive ELISA ein stärkeres Signal liefert, wenn die Probe eine geringe Menge an Antigenen enthält, ist der kompetitive ELISA ein sehr empfindlicher Assay, selbst für Proben mit einer geringen Anzahl von Antigenen.
In einigen kompetitiven ELISA-Kits wird anstelle eines markierten Antikörpers ein markiertes Antigen verwendet. Hier konkurrieren das markierte Antigen und das Probenantigen um die Bindung an den primären Antikörper. Wenn die Menge an Antigen in der Probe gering ist, ist die Menge an markiertem Antigen, die an Antikörper bindet, ebenfalls höher und erzeugt ein stärkeres Signal.
Was ist ein nicht-kompetitiver ELISA?
Unter den vier ELISA-Typen sind drei Typen nicht-kompetitiver ELISA. Sie sind direkter ELISA, indirekter ELISA und Sandwich-ELISA. Alle drei Formate arbeiten nach dem gemeinsamen ELISA-Prinzip mit leichten Unterschieden in ihren Methoden.
Direkter ELISA verwendet einen enzymmarkierten primären Antikörper. Daher ist kein sekundärer Antikörper erforderlich. Daher ist der direkte ELISA schneller als andere ELISA-Typen. Der primäre Antikörper bindet direkt an das immobilisierte Zielantigen, das in der Platte vorhanden ist. Daher findet die Enzym-Substrat-Reaktion statt, die ein sichtbares Signal erzeugt.
Abbildung 02: Sandwich-ELISA
Im Gegensatz zum direkten ELISA verwendet der indirekte ELISA einen unmarkierten primären Antikörper und einen enzymmarkierten sekundären Antikörper. Sobald der primäre Antikörper an das immobilisierte Antigen bindet, bindet der sekundäre Antikörper an den primären Antikörper. Das Enzym im Sekundärantikörper reagiert mit dem Antigen und erzeugt ein sichtbares Signal. Der Sandwich-ELISA unterscheidet sich sowohl vom direkten als auch vom indirekten ELISA. Dabei wird der Antikörper an der Wand der Testplatte immobilisiert.
Was sind die Ähnlichkeiten zwischen kompetitivem und nicht-kompetitivem ELISA?
- Kompetitiver und nicht-kompetitiver ELISA sind zwei Arten von Immunosorbent-Assay-Techniken.
- Es handelt sich um hochflexible und sensible Techniken.
- Darüber hinaus sind sowohl kompetitive als auch nicht kompetitive ELISA enzymgekoppelte Immunoassays.
- Außerdem erzeugen beide Methoden aufgrund einer Enzym-Substrat-Reaktion ein Signal.
Was ist der Unterschied zwischen kompetitivem und nicht-kompetitivem ELISA?
Kompetitiver ELISA ist ein ELISA-Typ, der auf der Vervollständigung zwischen Analyt-Antigen und markiertem Antigen für eine begrenzte Menge an spezifischem Antikörper beruht. Andererseits besteht keine solche Konkurrenz zwischen dem interessierenden Antigen und dem Referenzantigen im nicht-kompetitiven ELISA. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen kompetitivem und nicht kompetitivem ELISA. In ähnlicher Weise ist ein kompetitiver ELISA ein Hemmungs-ELISA, während ein nicht-kompetitiver ELISA kein Hemmungs-ELISA ist. Dies ist also auch ein Unterschied zwischen kompetitivem und nicht-kompetitivem ELISA.
Außerdem ist ein kompetitiver ELISA besser geeignet, um eine geringe Menge an interessierendem Antigen zu messen. Es ist eine sensible Methode. Andererseits hängt der nicht-kompetitive ELISA nicht von der Anzahl der in einer Probe vorhandenen Antigene ab. Daher ist dies auch ein Unterschied zwischen kompetitivem und nicht kompetitivem ELISA.
Die folgende Infografik erklärt den Unterschied zwischen kompetitivem und nicht-kompetitivem ELISA im Vergleich.
Zusammenfassung – Kompetitiver vs. nichtkompetitiver ELISA
Kompetitiver und nicht-kompetitiver ELISA sind die beiden Haupttypen von ELISA oder Enzyme-linked Immunosorbent Assays. Um den Unterschied zwischen kompetitivem und nicht kompetitivem ELISA zusammenzufassen, beruht der kompetitive ELISA auf der Konkurrenz zwischen dem interessierenden Antigen und dem Referenzantigen um die begrenzte Menge an Antikörpern. Daher wird der kompetitive ELISA auch als Inhibitions-ELISA bezeichnet. Andererseits beruht der nichtkompetitive ELISA nicht auf der Konkurrenz zwischen Zielantigenen und Referenzantigenen. Es verwendet einen Überschuss an markiertem spezifischem Antikörper gegen den interessierenden Analyten. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen kompetitivem und nicht kompetitivem ELISA. Direkter ELISA, indirekter ELISA und Sandwich-ELISA sind die drei Haupttypen von nicht-kompetitivem ELISA.
